細(xì)胞破碎的3種主要方法
1.勻漿器:先將剪碎的組織置于管中,,再套入研桿來回研磨,,上下移動(dòng),即可將細(xì)胞研碎,。此法細(xì)胞破碎程度比高速組織搗碎機(jī)為高,,適用于量少和動(dòng)物臟器組織。較易造成堵塞的團(tuán)狀或絲狀真菌,,較小的革蘭氏陽性首以及有些亞細(xì)胞器,,質(zhì)地堅(jiān)硬,易損傷勻漿閥,,也不適合用該法處理,。
2.組織搗碎:一般用于動(dòng)物組織、植物肉質(zhì)種子,、柔嫩的葉芽等,。由于旋轉(zhuǎn)刀片的機(jī)械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用。
3.研缽:多用于細(xì)菌或其他堅(jiān)硬植物材料,,研磨時(shí)常加入少量石英砂,,玻璃粉或其他研磨劑,以提高研磨效果,。
二,、化學(xué)及生物化學(xué)法
1.自溶法:在一定PH和適當(dāng)?shù)臏囟认拢媒M織細(xì)胞內(nèi)自身的酶系統(tǒng)將細(xì)胞破碎的方法,。此過程需較長時(shí)間,,常用少量防腐劑如甲苯等防止細(xì)胞的污染,。
2.化學(xué)滲透法:某些有機(jī)溶劑(如苯、甲苯),、抗生素,、表面活性劑、金屬螯合劑,、變性劑等化學(xué)藥品都可以改變細(xì)胞壁或膜的通透性從而使內(nèi)合物有選擇地滲透出來,。
3.酶溶法:利用各種水解酶,如溶菌酶,、纖維素酶,、蝸牛酶,、半纖維素酶,、脂酶等,將細(xì)胞壁分解,,使細(xì)胞內(nèi)含物釋放出來,。
三、物理法
1.反復(fù)凍溶法:將待破碎的細(xì)胞在-20度以下冰凍,,室溫融解,,反復(fù)幾次,由于細(xì)胞內(nèi)冰粒形成和剩余細(xì)胞液的鹽濃度增高引起溶脹,,使細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎,。
2.急熱驟冷法:將材料投入沸水中,維持85-90分鐘,,至水浴中急速冷卻,,此法可用于細(xì)菌及病毒材料。