核酸的定量是超微量分光光度計(jì)使用頻率最高的功能,?？梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸,，單鏈,、雙鏈DNA，以及RNA,。核酸的最高吸收峰的吸收波長(zhǎng)260nm,。每種核酸的分子構(gòu)成不一，因此其換算系數(shù)不同,。定量不同類型的核酸,，事先要選擇對(duì)應(yīng)的系數(shù)。測(cè)試后的吸光值經(jīng)過(guò)上述系數(shù)的換算,，從而得出相應(yīng)的樣品濃度,。。
分光光度計(jì)的設(shè)計(jì)原理和工作原理,，允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化都是正常的,，即儀器有一定的準(zhǔn)確度和精確度。影響吸光值A(chǔ)的幾個(gè)因素如下：
《1》核酸本身物化性質(zhì)和溶解核酸的緩沖液的pH值,，離子濃度等:在測(cè)試時(shí),，離子濃度太高，也會(huì)導(dǎo)致讀數(shù)漂移,，因此建議使用pH值一定,、離子濃度較低的緩沖液。
《2》樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素:由于樣品中不可避免存在一些細(xì)小的顆粒,，尤其是核酸樣品,。這些小顆粒的存在干擾測(cè)試效果,。為了大程度減少顆粒對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A,，吸光值最好在0.1-1.5A,。在此范圍內(nèi)，顆粒的干擾相對(duì)較小,，結(jié)果穩(wěn)定,。從而意味著樣品的濃度不能過(guò)低，或者過(guò)高(超過(guò)光度計(jì)的測(cè)試范
《3》操作因素,，如混合要充分,，否則吸光值太低，甚至出現(xiàn)負(fù)值;混合液不能存在氣泡,，空白液無(wú)懸浮物,，否則讀數(shù)漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測(cè)試空白液和樣品，否則濃度差異太大;換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇一致;不能采用窗口磨損的比色杯;樣品的體積必須達(dá)到比色杯要求的最小體積等多個(gè)操作事項(xiàng),。
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