BioProE細(xì)胞凍存液（不含蛋白,、DMSO和血清）使用方法

BioProE細(xì)胞凍存液基于控冰凍存技術(shù)，由明確化學(xué)成分組成,，不含有胎牛血清和動物源成分,、DMSO、和其他蛋白質(zhì)類物質(zhì),。自主研發(fā)控冰保護(hù)成分能夠使細(xì)胞復(fù)蘇后存活率達(dá)到90%以上,。目前已驗(yàn)證的常用細(xì)胞系包括CHO、HEK 293,、NS-1,、5637、A549,、HUH7,、HepG2、VERO,、MDCK,、293T、marc-145,、pk-15,。也可用于常見原代細(xì)胞的冷凍保存。

細(xì)胞凍存步驟

1,、常規(guī)方法收集對數(shù)生長期且細(xì)胞活率大于90%的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞置于離心管中,。

2、根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的密度和凍存管的大小確定所需凍存細(xì)胞數(shù),。

3,、將離心管放入離心機(jī)中以1,000rpm的轉(zhuǎn)速離心5分鐘。離心后吸棄上清液,，保留細(xì)胞沉淀,。

4、加入1-2mL的細(xì)胞凍存液于離心管中,，使細(xì)胞濃度約為 5×10⁵ -1×10⁷ /ml,。輕柔地混勻細(xì)胞，制成細(xì)胞混合液,。

5,、分裝于已標(biāo)記的凍存管中,。

6、直接放入-80℃超低溫冰箱中,，可保存一年,。

7,、如果想長期保存,，需先放入-80℃冰箱至少一天時間，方可移至液氮罐中保存,。

凍存細(xì)胞復(fù)蘇步驟

1,、從-80℃冰箱或液氮中取出凍存的細(xì)胞，立即置于37℃水浴鍋中快速融化,。

2,、待凍存管中的細(xì)胞混合液wan全融化后轉(zhuǎn)移到無菌離心管中，立即加入等體積的細(xì)胞wan全培養(yǎng)基與細(xì)胞混合,，1,000rpm離心5分鐘,，移除上清液，收集細(xì)胞沉淀,。

3,、加入適量的wan全培養(yǎng)基，沿著管壁緩緩加入細(xì)胞沉淀中,，輕柔混勻,，將混勻好的細(xì)胞移至事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)瓶中。

4,、鏡檢觀察,，待細(xì)胞狀態(tài)恢復(fù)后可進(jìn)行其他研究或者培養(yǎng)處理。