培養(yǎng)基CW003可適用的High Five等昆蟲細胞的馴化方法2025更新

產(chǎn)品描述

CW003培養(yǎng)基適用于sf9,、High Five等昆蟲細胞懸浮培養(yǎng)和瞬時表達,，含有細胞生長的全

部營養(yǎng)成分，無需添加物即可使用,。

產(chǎn)品特點

? 產(chǎn)品不含血清

? 即用型培養(yǎng)基,，無需添加額外成分

? 支持sf9、High Five等昆蟲細胞的懸浮培養(yǎng)馴化與高密度培養(yǎng)

? 支持桿狀病毒載體表達系統(tǒng)生產(chǎn)重組基因蛋白

基礎參數(shù)

產(chǎn)品使用方法

細胞馴化與傳代

1） 培養(yǎng)條件

溫度：27oC,；搖床轉速：110-130 rpm,；傳代細胞密度控制在0.8-1.2×106 cells/mL。

2） 直接馴化

大部分情況下,，培養(yǎng)于其他培養(yǎng)基中的sf9,、High Five細胞，可以直接適應至CW003培養(yǎng)

基,，只要按照日常傳代方式（稀釋）更換培養(yǎng)基即可,。

3） 漸進式馴化

注意：選用低代次、處于對數(shù)的細胞進行馴化,。

①在原培養(yǎng)基中復蘇細胞并繼續(xù)使用該培養(yǎng)基傳代2到3次至細胞生長穩(wěn)定,，使用原培養(yǎng)基

+CW003培養(yǎng)基（CW003比例從25%至90%）逐漸馴化，傳代細胞密度控制在0.8-1.1×106

cells/mL,，每48h進行傳代,。

②待細胞在含90%以上CW003培養(yǎng)基生長正常后，可嘗試將細胞傳代至100% CW003培養(yǎng)基

中,，并連續(xù)傳代3-4次,，如細胞保持穩(wěn)定生長，即已適應至CW003培養(yǎng)基,。

細胞復蘇

1） 迅速取出凍存的細胞,，在37℃水浴條件下進行快速解凍（可以在水中輕輕晃動，時間控制

在120s以內）,，至凍存管內剩余小塊冰晶,。

2） 在生物安全柜中，將融化的細胞全部轉移至無菌離心管中,，加入10 mL預熱至37℃的培養(yǎng)

基,，離心換液（175 g，5 min）去除全部上清，加入20-30mL預熱至37℃新鮮培養(yǎng)基重懸,，后

轉移至搖瓶培養(yǎng),。

細胞凍存

1） 凍存細胞時，要選擇處于對數(shù),、狀態(tài)良好,，活力≥98%的的細胞；

2） 事先計算好凍存的細胞管數(shù)和所用的培養(yǎng)基的體積,，凍存密度為2.5-3.5×107 （通常凍存

濃度為1.0-2.0×107）cells/ml/支,；

3） 細胞凍存液配制：

45%新鮮培養(yǎng)基+45%原培養(yǎng)基（上清）+10%DMSO，充分混勻,，存放于4℃,，一般為當

天用當天制備；

4） 以175 g,，5 min的條件離心收集細胞,，棄上清,，用凍存培養(yǎng)基（

4℃ ）重懸細胞,；

5） 將重懸的細胞液迅速分裝細胞到無菌的凍存管中，每支1ml,，并貼好標簽,；

6） 將細胞凍存管放到程序降溫凍存盒（注意填充異丙醇，4℃預冷）中,，置于-80℃ 冰箱(每

分鐘下降1℃),，過夜存放后將細胞轉入液氮罐中進行保存。