2025年Zeta Life 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞如何提高轉(zhuǎn)染效率

用試劑轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞怎樣提高轉(zhuǎn)染效率一直是困擾實(shí)驗(yàn)者的一道難題，特別對于10000左右質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染更是困難,；我們實(shí)驗(yàn)室總結(jié)了用Zeta Life公司Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑貨號AD600025轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞一套優(yōu)化方案希望對大家轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞提高轉(zhuǎn)染效率有一定的幫助,。

下圖是8000bp左右的pEGFP-C1在6孔板用Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞的熒光和細(xì)胞明場圖片。

提高轉(zhuǎn)染raw 264.7細(xì)胞條件如下

一,、質(zhì)粒DNA準(zhǔn)備

1,、質(zhì)粒DNA濃度700ng/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水；②無內(nèi)毒素）,，我用QIAGEN試劑盒除去的內(nèi)毒素

二,、操作流程

1、先將細(xì)胞接種到細(xì)胞培養(yǎng)板,，細(xì)胞匯合度在70%左右,，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

2,、復(fù)合物制備：將質(zhì)粒DNA與Zeta Life Advanced Transfection Reagent貨號AD600025轉(zhuǎn)染試劑按照1:1（12ug:12ul）關(guān)系直接混合,，用移液器吹吸10-15次混勻，室溫靜止10-15分鐘,。

3,、將復(fù)合物加入*培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)板，并輕輕混勻,，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)（不建議把復(fù)合物加入到無血清的培養(yǎng)基里面,，我后期會進(jìn)一步摸索此條件）。

4,、轉(zhuǎn)染24小時后對細(xì)胞進(jìn)行正常換液,。

5,、質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率

三,、注意事項(xiàng)：

1本轉(zhuǎn)染方法不適用在下面轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染如：lipo3000、,FuGENE 6,、FuGENE HD,、Effectene等；

2細(xì)胞培養(yǎng)基：Zeta Life公司 z7181-500胎牛血清,，Gibco公司DMEM;

四,、美國Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑信息：

五、RAW 264.7細(xì)胞簡述：

RAW 264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞. 此細(xì)胞株源自雄性Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤,。 sIg-, Ia-抗原,、Thy-1.2表面抗原陰性,。此細(xì)胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點(diǎn)形成試驗(yàn)陰性,。 可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖,。 可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。