2025 年 AD600050 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染 RAW264.7 細胞質(zhì)粒的全新應用

RAW264.7 細胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑是一款具有創(chuàng)新性的新型小分子多肽轉(zhuǎn)染試劑,，其du特之處在于進入細胞后能夠被代謝,，對細胞無毒性作用，有效避免了細胞死亡的情況發(fā)生,，并且不會激活細胞的免疫機制,，為細胞實驗提供了更安全、穩(wěn)定的條件,。

一,、RAW264.7 細胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品詳情

Zeta Life 公司與美國加利福尼亞大學舊金山校區(qū)攜手合作，聯(lián)合開發(fā)出了用于哺乳動物細胞以及活體動物轉(zhuǎn)染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑,。這一先進技術已成為蛋白功能研究,、免疫細胞及干細胞治療、研發(fā)與生產(chǎn)等領域的關鍵核心技術,。

Zeta Life 轉(zhuǎn)染試劑具備強大的轉(zhuǎn)染能力,，能夠成功攻克那些極難轉(zhuǎn)染的免疫細胞和懸浮細胞,，比如 T 細胞、NK 細胞,、人淋巴細胞,、THP-1 細胞等。同時,，它還可以高效率地將 siRNA 轉(zhuǎn)染到任何哺乳動物細胞中,，廣泛應用于將 DNA 和 siRNA 轉(zhuǎn)染到真核細胞系以及各種原代細胞的實驗中。此外,，該轉(zhuǎn)染試劑在轉(zhuǎn)染細胞后,，可在 10 小時內(nèi)實現(xiàn)快速代謝，是第三代的新型轉(zhuǎn)染試劑,，為科研實驗帶來了極大的便利和優(yōu)勢。

二,、產(chǎn)品說明

1. 產(chǎn)品名稱：Advanced DNA RNA Transfection      Reagent

2. 包裝規(guī)格

• 貨號：AD600025,、AD600050、AD600075,、AD600150

• 規(guī)格：0.25ml,、0.5ml、0.75ml,、1.5ml

3. 儲存條件：常溫運輸,，需在 4℃環(huán)境下保存，在該條件下可保存兩年之久,。嚴禁反復凍融,，以免影響試劑的性能和效果。

三,、RAW264.7 細胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染質(zhì)粒大小 6000bp 效果圖和轉(zhuǎn)染操作方法

1. 細胞接種：提前 1 天進行細胞接種,，確保在轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度達到 60%-80% 左右，為轉(zhuǎn)染創(chuàng)造良好的細胞狀態(tài),。

2. 核酸復合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 的比例直接混合,，使用移液器反復吹吸 10-15 次，使兩者充分混勻,，然后在室溫下靜止放置 10-15 分鐘,，形成穩(wěn)定的核酸復合物。

3. 加入核酸復合物到細胞培養(yǎng)基：根據(jù)參考用量,，將制備好的核酸復合物加入到細胞培養(yǎng)基中,，并輕輕混勻。值得注意的是,，細胞培養(yǎng)基中可以含有血清,，這為細胞提供了更接近生理狀態(tài)的環(huán)境,。

4. 細胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時后，對細胞進行正常的換液操作,。但對于懸浮細胞而言,，在整個轉(zhuǎn)染過程中無需進行換液，簡化了實驗操作流程,。

5. 結果分析

• 對于質(zhì)粒       DNA 轉(zhuǎn)染,，在轉(zhuǎn)染 48-72 小時后，通過熒光檢測來評估轉(zhuǎn)染效率,；在 48-96 小時后,，檢測 mRNA 或蛋白的表達情況。如果要進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選,，則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時左右,，加入適量的藥物進行篩選操作。

• 對于       siRNA 轉(zhuǎn)染,，在轉(zhuǎn)染后 9 小時通過熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,，在 48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白的表達情況，從而準確評估轉(zhuǎn)染效果,。

四,、注意事項

1. 質(zhì)粒溶解要求：質(zhì)粒 DNA 必須溶解于無菌雙蒸水或超純水中，絕對不能溶解于提取試劑盒所提供的 Buffer,。因為溶解于 Buffer 中的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率會大幅下降,，降幅可達 80% 左右，嚴重時甚至會導致轉(zhuǎn)染wan全失敗,。

2. 內(nèi)毒素去除：質(zhì)粒必須che底去除內(nèi)毒素,，內(nèi)毒素對細胞具有很強的毒性，會使轉(zhuǎn)染效率下降 70%-80% 左右,，甚至可能導致轉(zhuǎn)染失敗,。建議使用 Qiagen、TIANGEN,、Omega 等品牌的去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒進行處理,，以確保質(zhì)粒的質(zhì)量。

3. 復合物制備規(guī)范：在復合物的制備過程中,，嚴禁使用其他任何試劑對核酸或轉(zhuǎn)染試劑進行稀釋,，只需將核酸和轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 的比例直接混合即可。如果進行了稀釋操作,，將會導致轉(zhuǎn)染失敗,，影響實驗結果。

4. 混勻與孵育：將轉(zhuǎn)染試劑與核酸充分混勻后，使用移液器吹打 10-15 次,，然后在室溫下孵育 10-15 分鐘,，之后便可將其加入細胞培養(yǎng)板中。

5. 換液時間：轉(zhuǎn)染 24 小時后才能進行正常的換液操作,，與 Lipo2000 不同,，不能在轉(zhuǎn)染 4-6 小時后就進行換液，否則會影響轉(zhuǎn)染效果,。

6. 培養(yǎng)基要求：在對原代細胞,、免疫細胞進行轉(zhuǎn)染時，細胞基礎培養(yǎng)基中不能含有雙抗培養(yǎng)基,，以免對細胞產(chǎn)生不良影響,，干擾轉(zhuǎn)染過程。