美國Biozellen-3D細胞培養(yǎng)基質膠套裝2025已更新

產品概述：

Biozellen®3D細胞培養(yǎng)基質膠套裝

Biozellen®基質膠 特點

1,、100%植物源材料,，無任何動物成分,；

2,、胺基酸序列100%人源化 ；

3,、可調控基質膠硬度進行多種細胞培養(yǎng),；

4、3D細胞/類器官培養(yǎng)種類數量范圍更廣,；

5,、無人畜共通病原菌或毒素風險；

6,、適用于醫(yī)療生物原料,；

7、高活性,、高純度,、可融化；

8,、4度運輸,、4度保存；

9,、2年保存時間,；

10、3D培養(yǎng)結束后基質膠可以溫和融化,，并保留3D細胞/類器官結構完整性,；

Biozellen®3D細胞培養(yǎng)基質膠套裝

Catalog No.   B-P-00002-2、B-P-00002-4,、B-P-00002-10                

Specification  2ml-kit,、4ml-kit 、10ml-kit

Storage       4℃保存、 保存兩年

一,、產品描述

Biozellen®3D細胞培養(yǎng)基質膠套裝包含整套基質膠,、膠體固定液、膠體溶解液,，可應用到3D細胞培養(yǎng)與微環(huán)境應用等,；本試劑盒操作便利且可調控基質膠硬度進行多種細胞培養(yǎng)測試等；膠體可快速被固定液分解,， 請操作詳細閱讀此使用指南,。

（Biozellen®3D細胞培養(yǎng)基質膠套裝為植物來源，無動物源成分,、不含酚紅）

二,、應用

•3D細胞球體培養(yǎng)

•小鼠皮下成瘤

•細胞侵襲

•適合用于3D細胞藥物篩檢平臺

•細胞生長和分化

•代謝/毒理學研究

三、樣本類型

•腫瘤細胞系,、哺乳動物組織

四,、試劑盒組分

 五、3D細胞球體培養(yǎng)試驗步驟：

A,、試劑制備

1,、A基質膠：將A基質膠溶于37℃水浴槽回溫10分鐘， 確認wan全融解.

2,、C緩沖溶液(1X)制備：使用將10X C緩沖溶液用冰的無細胞培養(yǎng)液(例如： 無血清DMEM,、opt-MEM) 制備成 1X C 緩沖溶液。(不要用 PBS 稀釋 C 緩沖液) .

3,、D 緩沖溶液(1X)制備: 使用用冷的 1x PBS 稀釋 10X D 緩沖溶液至 1X D 緩沖溶液.

B,、Biozellen®3D細胞培養(yǎng)基質膠的制備

全部步驟需要在無菌環(huán)境內操作,，操作步驟如下：

1,、將24孔培養(yǎng)板放置于冰上預冷半小時。
2、細胞計數后取 2×10⁵~2×10⁷ 細胞與 0.5 毫升 37℃ 細胞培養(yǎng)基均勻混合,，并與0.5毫升37℃ A膠按照 1:1 等比例均勻混合,，終細胞密度1*10⁵~1*10⁷cells/mL。

注：請選擇適當的培養(yǎng)溶液與條件進行試驗,。

3,、取 20-40 微升步驟 2的混合液滴于 步驟 1 預冷的培養(yǎng)板上，膠體將于 5 分鐘內成膠,。 注: 測試膠體是否成膠,，可用微量吸管尖溫和的觸碰膠體表面進行確認。

4,、待膠體成膠后,，添加1毫升冰的1X C緩沖溶液，并蓋過步驟3 的膠溶液,，固定 15 分鐘,。

5、待15分鐘固定后,，小心的吸取 C 緩沖溶液并置換為適合此細胞生長之培養(yǎng)基溶液,。

6、將含有細胞的膠于37°C 二氧化碳培養(yǎng)箱內進行7~14天的培養(yǎng),，并觀察細胞球體的形成,，按正常培養(yǎng)基更換頻率進行更換操作。

C,、溶膠與收集細胞球體準備程序

1,、小心的將培養(yǎng)基吸取移除，并用1X PBS進行清洗,。

2,、小心的將 1X PBS 吸取移除，并添加 1 毫升冰的D緩沖溶液,，蓋過膠滴于室溫反應 5分鐘,。

3、溫和的用1毫升移液管吸取,，直到膠滴wan全溶解,。

4、將含有細胞球體的溶液吸入1.5 毫升離心管,，用1000 rpm的轉速離心10分鐘,，移除上清液體并收集細胞球體做分析。  

D,、收集單顆細胞準備程序

在分離單細胞,，先按上述溶膠與收集細胞球體準備程序進行操作

1,、添加trypsin-EDTA并與收集的細胞球體于37°C混合反應。

2,、用1毫升移液管混合,，直到細胞體wan全分解。

3,、待細胞球體wan全分解,，加入3倍體積的1X PBS，并用1000轉的轉速進行離心10分鐘,，并移除上清液體收集沉淀的單細胞做分析,。

六、細胞侵襲實驗準備程序

A,、試劑準備:

1,、C緩沖溶液 (0.5 X) 制備 : 使用37 ℃水浴回溫的無血清細胞培養(yǎng)液 (例如: 無血清DMEM等，用于稀釋A膠) 稀釋C緩沖溶液 (10 X)  (貨號: B-P-00002-C)至C緩沖溶液 (0.5 X), 即體積稀釋20倍,。使用放置37度水浴槽,。 (例如:1 mL C緩沖溶液 (10 X) + 19 ml 無血清DMEM; 如未使用完畢，可保存于4 ℃ 冰箱, 保存一周)

2,、A膠 (1X) 制備 : 將 A膠 (2X) (貨號: B-P-00002-A) 置于37 ℃水浴槽回溫10分鐘,，確認wan全溶解。再將37 ℃水浴回溫的無血清細胞培養(yǎng)液取 0.5 mL,，加至37 ℃已溶解的 0.5 mL A膠 (2X),，配置成1 mL 的 A膠 (1X)。使用置于37度,，可降低A膠黏度,。(單次使用，勿重復冷凍解凍 A膠 (1X) )

B,、細胞侵襲實驗步驟

1,、準備適用24孔板的Transwell裝置(例如:康寧Transwell insert, 8 μm PET membrane)。

2,、用37 ℃已回溫的C緩沖溶液 (0.5 X)將A膠 (1X) 原液體積稀釋5-20倍,，建議一開始可選用15倍。 (根據細胞種類做稀釋比例對比實驗,，找出適合自己實驗體系的稀釋倍數,，稀釋倍數越高，膠體越軟,，越容易穿透)

3,、根據Transwell上室底部面積加入步驟2的 0.1 mL 稀釋后的A膠稀釋液到Transwell上室中。

4,、將步驟4在 4 ℃ 冰箱孵育2-3小時,。

5,、在Transwell上室中加入0.1 mL 無血清的細胞懸液，使細胞終濃度約7.5 x 10⁴ cells/well.,。

6、在Transwell下室中加入0.8 mL 含10 %血清的細胞培養(yǎng)液做為chemoattractant,，吸引細胞進行遷移及分泌基質蛋白酶 (MMP) 侵襲,。 (對照組為Transwell下室中加入含0.8ml無血清的細胞培養(yǎng)液)。

7,、將細胞培養(yǎng)板在37 ℃, 5 % CO2培養(yǎng)箱孵育24-48 小時,。

8、移除培養(yǎng)液,，以PBS 清洗2次,。

9、用棉簽輕輕擦掉上層未遷移的細胞,。

10,、加入1 ml 100 % 甲醇室溫固定30分鐘,再以PBS 清洗2次。

11,、加入 1 ml 0.1 % 結晶紫染液 ( 0.1 % (g/ml) PBS 結晶紫) 室溫染色20 分鐘,，再以PBS 清洗2次。

12,、將Transwell移至載玻片上,，在顯微鏡下隨機6-9個視野觀察計算遷移的細胞數。

七,、小鼠皮下成瘤實驗準備程序

A,、細胞房內材料準備、試劑制備及步驟

(1) 材料準備:

1. 冰盒,、2. 37 ℃ 水浴槽,、3. C緩沖溶液(10X)、4. 無血清細胞培養(yǎng)液 (例如: 無血清DMEM,，DMEM-F12等,，不可用 PBS )、5. A膠 (2X),、6. 細胞培養(yǎng)液,、7.  23-26G針頭、8. 1 mL針筒,、9. 細胞,。

(2) 試劑制備:

1、C緩沖溶液 (0.5 X) 制備 : 使用 37 ℃ 水浴回溫的無血清細胞培養(yǎng)液 (例如: 無血清DMEM或DMEM-F12等,，不可用 PBS ) 稀釋 C緩沖溶液 (10 X) 至 C緩沖溶液 (0.5 X), 即體積稀釋20倍,。使用放置37度水浴槽,。(例如:1 mL C緩沖溶液 (10 X) + 19 ml 無血清DMEM; 若未使用完畢，可先保存于4 ℃ 冰箱, 保存一周)

2,、A膠 (1X) 制備 : 將 A膠 (2X) (貨號:B-P-00002-A) 置于37 ℃ 水浴槽回溫10分鐘,，確認wan全溶解。再將 37 ℃ 水浴回溫的無血清細胞培養(yǎng)液取 0.5 mL,， 加至 37 ℃ 已溶解的 0.5 mL A膠 (2X),，配置成 1 mL 的 A膠 (1X)。使用置于37度,，可降低黏度,。 (單次使用，勿重復冷凍解凍 A膠 (1X) )

(3)步驟:

1,、取細胞溶液離心后收集細胞沉淀,，與C緩沖溶液 (0.5 X) 均勻混合使細胞濃度為3*10⁶ cells/mL。

2,、A膠 (1X) 與步驟 1 含 C緩沖溶液 (0.5 X) 的細胞系懸浮液,，按照 2:1 比例均勻混合配置，細胞懸浮液終濃度為 10⁶ cells/mL,。使用置于37℃,，可降低黏度。 (C緩沖溶液用于A膠凝膠反應,，例如0.5ml C 緩沖溶液(0.5 X)含細胞 加入 1ml A膠 (1X) 混合成1.5ml 的注射液)

3,、選用 23-26 G 的針頭 (建議選用 24 G) 及 1 mL 針筒，抽取 步驟2 A膠與 C緩沖溶液的細胞混合液至所需注射體積 (例如:0.2-0.6 mL) ,。室溫37℃至20℃操作抽取,。 (若抽取時發(fā)生塞針狀態(tài)，可先把針頭拔掉,，以針筒進行抽取,，建議一次抽取配置好所需針筒數量，避免步驟2 溶液過度凝膠,，發(fā)生塞針)

4,、將抽取好步驟 3 的針筒，帶入動物房, 若短時間無法施打建議置于冰上,。

B,、動物房內材料準備及步驟

(1)材料準備:

1. 含 A膠與 C緩沖溶液的細胞混合液的針筒、2. 皮膚消毒劑 (例如 : 酒精),、

3. 手套,、4. 實驗小鼠、5. 麻醉小鼠的試劑

(2)步驟:

1,、室溫下可直接注射,。若是置于冰盒上的針筒,，回到室溫后，待液化再進行注射,。 含 A膠與 C緩沖溶液的細胞混合液的針筒,，以皮下注射方式，注射實驗所需的體積至實驗鼠 (建議皮下注射量為 0.2 mL,，實際狀況依需求而定),。(針筒放冰上注射阻力會上升, 放室溫會液化注射阻力小。注射時若因凝膠緣故而阻力變大,，需緩慢注射避免針頭噴落)

注1 : 注射體積可依不同實驗目的做調整,，若為皮下血管生成研究注射體積需至少0.5 mL以上,。

注2 : 此步驟依實驗需求可執(zhí)行或不執(zhí)行,，若需呈現(xiàn)明顯的皮下注射隆起效果，可調整2.試劑制備將C緩沖溶液 (10 X) 稀釋15倍,，變成C緩沖溶液 (0.66 X),，再執(zhí)行后續(xù)成膠實驗；提高C濃度,，可提高膠體硬度,。

2、培養(yǎng)一至三周后觀察量測接種的腫瘤尺寸,。

注3 : 若為血管生成研究,，應注射含VEGF及heparin的A膠，以促進血管生成,。約三天后,，可摘取含有新血管生成的腫瘤組織。

八,、案例分享

A,、形成3D腫瘤球體成功案例分享

 B.Biozellen基質膠被溶解后分離的完整3D細胞結構照片

培養(yǎng)后的3D細胞球體， 在Biozellen基質膠被試劑盒里面的

D Buffer溶解分離后仍然可以得到完整的3D細胞結構