轉(zhuǎn)染試劑AD600050轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞質(zhì)粒2024新

RAW264.7細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)入細(xì)胞后可以被代謝的新型小分子多肽轉(zhuǎn)染試劑，對(duì)細(xì)胞無毒性,，不易出現(xiàn)細(xì)胞死亡,，不激活細(xì)胞免疫機(jī)制。

一,、RAW264.7細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品詳情：

Zeta Life 公司與美國加利福尼亞大學(xué)舊金山校區(qū)聯(lián)合開發(fā)用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞,、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑，此技術(shù)成為新的蛋白功能,、免疫細(xì)胞及干細(xì)胞治療,、研發(fā)及生產(chǎn)的主要關(guān)鍵技術(shù)之一,。Zeta Life轉(zhuǎn)染試劑可轉(zhuǎn)染極度難轉(zhuǎn)染的免疫細(xì)胞,、懸浮細(xì)胞，如:T細(xì)胞,、NK細(xì)胞,、人淋巴細(xì)胞、THP-1等,；可高效率轉(zhuǎn)染siRNA到任何哺乳動(dòng)物細(xì)胞;用于將 DNA 和 siRNA 轉(zhuǎn)染到真核細(xì)胞系和各種原代細(xì)胞中,；轉(zhuǎn)染細(xì)胞后可10小時(shí)內(nèi)快速代謝的第三代新轉(zhuǎn)染試劑。

二,、產(chǎn)品說明：

1,、產(chǎn)品名稱

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2、包裝規(guī)格

貨號(hào)：AD600025 ,、AD600050,、AD600075、AD600150

規(guī)格：0.25ml,、0.5ml,、0.75ml、1.5ml

3,、儲(chǔ)存條件

常溫運(yùn)輸,，4℃保存，可保存兩年,，拒絕反復(fù)凍融,。

三,、RAW264.7細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染質(zhì)粒大小6000bp效果圖和轉(zhuǎn)染操作方法

操作方法

提前 1 天接種細(xì)胞：細(xì)胞匯合度在 60-80%左右，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。

核酸復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻,，室溫靜 止 10-15 分鐘,。

在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物：根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物，并輕輕混勻,；細(xì)胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清,。

細(xì)胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液，懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液,。

分析結(jié)果：質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時(shí)后熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,，48-96 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白表達(dá)。若 進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選,，則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選,。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時(shí)熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，48-72 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白表達(dá),。

四,、注意事項(xiàng)：

1、質(zhì)粒 DNA 必須溶解于無菌雙蒸水或超純水,，但不能溶解于提取試劑盒提供的 Buffer。溶解于 Buffer 的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率會(huì)下降 80%左右,，甚至?xí)D(zhuǎn)染失敗,。

2、質(zhì)粒必須去除內(nèi)毒素,，內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞將產(chǎn)生很大的細(xì)胞毒性,，會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率下降 70%-80%左 右，甚至導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失?。ㄍ扑]使用 Qiagen、TIANGEN,、Omega 去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒）。

3,、復(fù)合物的制備過程中是絕不能用其他任何試劑對(duì)核酸或轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行稀釋，只需將核酸和轉(zhuǎn)染 試劑兩者按 1:1 比例直接混合,，如果進(jìn)行了稀釋會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失,。

4、轉(zhuǎn)染試劑與核酸混勻后用移液器吹打 10-15 次,，室溫孵育 10-15 分鐘后即可加入細(xì)胞培養(yǎng)板。

5,、轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后進(jìn)行正常換液,，不能像 Lipo2000 一樣轉(zhuǎn)染 4-6 小時(shí)后換液。

6,、原代細(xì)胞,、免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)，細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基里面不能含有雙抗培養(yǎng)基,。