NuSmart^®核酸直接釋放技術(shù)應(yīng)用在細(xì)菌鑒定中

細(xì)菌屬于原核生物的一種,，雖然結(jié)構(gòu)相對簡單，但是在生物界屬于數(shù)量最多的一類生物,。細(xì)菌在生物界扮演著多重角色,，既有乳品生產(chǎn)、抗生素生產(chǎn),、廢水處理等積極的一面,，也有作為病原菌感染人和牲畜從而導(dǎo)致疾病傳播的危害一面,。所以了解和控制細(xì)菌的特征和特性，對日常生產(chǎn)生活至關(guān)重要,。

實(shí)驗(yàn)室條件下,，細(xì)菌的鑒定主要有培養(yǎng)、生化鑒定,、血清學(xué)鑒定等,，但是這些方法均費(fèi)時(shí)費(fèi)力，尤其是細(xì)菌培養(yǎng),。而分子生物學(xué)方法是近年來更多被應(yīng)用的方法,，例如PCR技術(shù)。該技術(shù)對不易生長,，培養(yǎng)條件復(fù)雜,，未知細(xì)菌等表現(xiàn)良好?？偨Y(jié)發(fā)現(xiàn)PCR在細(xì)菌中的應(yīng)用包括以下方向：

1,、基于16S rDNA基因的快速鑒定；

2,、特異性基因的鑒定,，例如毒力基因、耐藥基因等,；

3,、食品微生物檢測,；

4,、細(xì)菌數(shù)量動(dòng)態(tài)檢測；

5,、常見呼吸道病原菌篩查,；

6、細(xì)菌DNA圖譜制作等,。

對于實(shí)驗(yàn)室工作人員來說,，細(xì)菌難培養(yǎng)，細(xì)菌增殖數(shù)量不夠,，環(huán)境中細(xì)菌復(fù)雜程度高等難點(diǎn),。而能夠成功培養(yǎng)到目標(biāo)細(xì)菌，且數(shù)量達(dá)標(biāo)是PCR的關(guān)鍵前提,。目前實(shí)驗(yàn)室工作人員常用細(xì)菌DNA柱式提取試劑盒進(jìn)行基因組DNA的提取純化,。該方法作為經(jīng)典方法長期被使用，但是整個(gè)操作過程需要40-90分鐘不等,，使用溶菌酶和蛋白酶K等生物活性酶類,，多次反復(fù)離心,，步驟繁多、使初學(xué)的操作者體驗(yàn)樂趣嚴(yán)重降低,。我司開發(fā)的NuSmart^®微生物 PCR 試劑盒che底解決以上痛點(diǎn)問題,。優(yōu)點(diǎn)如下：

—對樣本量要求低（1-2uL菌液，1個(gè)菌斑）

—操作快速（5分鐘釋放基因組DNA）

—操作簡單

—檢出率達(dá)99.99%

案例A 對數(shù)生長期細(xì)菌快速擴(kuò)增16S rDNA

革蘭氏陰性菌：1 大腸桿菌 2 胞曼氏不動(dòng)桿菌 3 肺炎克雷伯菌 4 奇異變形桿菌 5 銅綠假單胞菌

革蘭氏陽性菌：6 蠟狀芽孢桿菌 7 糞腸球菌 8 肺炎鏈球菌 9 金黃色葡萄球菌 10 假中間葡萄球菌

使用NuSmart^®微生物 PCR 試劑盒（貨號Nu-Mi01）處理對數(shù)生長期菌液,，2× MIC Smart Mix擴(kuò)增16S rDNA基因,。

案例B 單菌落快速擴(kuò)增16S rDNA

革蘭氏陰性菌：1 大腸桿菌 2 胞曼氏不動(dòng)桿菌 3 肺炎克雷伯菌 4 奇異變形桿菌 5 銅綠假單胞菌

革蘭氏陽性菌：6 蠟狀芽孢桿菌 7 糞腸球菌 8 肺炎鏈球菌 9 金黃色葡萄球菌 10 假中間葡萄球菌

使用NuSmart^®微生物 PCR 試劑盒（貨號Nu-Mi01）處理菌斑（至于生理鹽水中），2× MIC Smart Mix擴(kuò)增16S rDNA基因,。

案例C 甘油菌快速擴(kuò)增16S rDNA

革蘭氏陰性菌：1 大腸桿菌 2 胞曼氏不動(dòng)桿菌 3 肺炎克雷伯菌 4 奇異變形桿菌 5 銅綠假單胞菌

革蘭氏陽性菌：6 蠟狀芽孢桿菌 7 糞腸球菌 8 肺炎鏈球菌 9 金黃色葡萄球菌 10 假中間葡萄球菌

使用NuSmart^®微生物 PCR 試劑盒（貨號Nu-Mi01）處理甘油菌,，2× MIC Smart Mix擴(kuò)增16S rDNA基因。