Nu-16S01

試劑盒應(yīng)用

本試劑盒主要用于細(xì)菌16S rDNA 的快速檢測，無需經(jīng)過繁瑣的基因組DNA 提取純化,，取樣后直接PCR 擴(kuò)增即可獲得16S rDNA 信息，通過比對16S 片段序列,，終獲得細(xì)菌種屬信息,。本試劑盒可以檢測量低至104 個(gè)/mL 個(gè)細(xì)菌，對難培養(yǎng),、珍貴樣本,、表型不能鑒定的未知細(xì)菌快速擴(kuò)

增尤為方便。使用本試劑盒無需提取純化,，可直接對菌斑,、甘油菌或?qū)?shù)菌進(jìn)行檢測，從而大大縮短了檢測時(shí)間,。試劑盒中提供的16S PCR Premix 已包含有染料,，PCR 結(jié)束后直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，PCR 產(chǎn)物可直接進(jìn)行測序分析,。

本產(chǎn)品僅供研究使用,，不可用于臨床、食品,、化妝品等域,。

保存條件

-20oC 保存。使用時(shí)請置于冰上,。

使用方法

1、樣本準(zhǔn)備：

1）菌液：取對數(shù)期菌液1-3 μL 加入PCR 反應(yīng)體系中,。

2）甘油菌：取1μL 菌液加入PCR 反應(yīng)體系中,。

3）單菌落：無菌吸頭或者無菌牙簽挑取單個(gè)菌落置于500 μL 無菌生理鹽水中，渦旋混合均勻,，取

1-3 μL 加入PCR 反應(yīng)體系中,。

2、推薦PCR 反應(yīng)體系

3,、按照以下方法設(shè)定PCR 反應(yīng)

4,、瓊脂糖凝膠電泳

使用1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳,，不同菌株電泳片段稍微差別，一般為1.5kb 左右,。

5,、PCR 產(chǎn)物回收和測序

使用切膠回收試劑盒進(jìn)行回收，并使用以下推薦引物進(jìn)行測序,。將DNA 測序結(jié)果與NCBI 數(shù)據(jù)

庫進(jìn)行比對,，確定細(xì)菌種類。

注意事項(xiàng)

1,、超凈臺(tái)中操作,，應(yīng)佩戴無菌手套，穿實(shí)驗(yàn)服,，操作用75%乙醇對實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行消毒,。

2、使用無菌移液吸頭和離心管,，開蓋務(wù)必輕柔,，減少氣溶膠污染。

3,、盡可能使用2 次純化細(xì)菌,，以提高測序效率。