Col-R0101 試劑盒應(yīng)用 本試劑盒采用利裂解液配方在 10 分鐘內(nèi)完成細(xì)胞和組織樣本的裂解,、提取和純化,。無需使用蛋白酶 K、無需低溫離心,，無需使用有機(jī)試劑,。該配方中含有 RNA 保護(hù)劑，能夠抑制RNA降解,、保護(hù)RNA 完整,，從而提高 RNA 產(chǎn)量。提取 RNA 可用于 RT-PCR,、RT-qPCR,、Northern Blot、分子克隆,、文庫構(gòu)建等,。 本試劑盒僅供研究使用,，不可用于臨床、食品,、化妝品等域,。

保存條件

室溫保存一年。

自備材料

水浴鍋或金屬浴,、無水乙醇,、無 DNase 無 RNase 離心管、DNase I（2U/μL,，或貨號QR0102）使用方法

1. 樣本處理

1.1 從動物組織中提取 RNA

1.1.1 取 20-100mg 樣本放入液氮中充分研磨后,，加入 700μL 裂解液 C，顛倒混勻,?；蛘呷?20-100mg 樣本加入 700μL 裂解液 C，加入 1 顆鋼珠,，放入組織研磨器中,，研磨1-2 分鐘。備注：不同樣本中 RNA 含量差異很大,，過多使用樣本容易導(dǎo)致堵塞,，終導(dǎo)致RNA提取量下降。

1.1.2 55℃孵育 1 分鐘,。

1.1.3 12,000rpm 離心 1 分鐘,，取 500μL 上清。

1.1.4 加入 250μL 無水乙醇,，充分混勻,。按照步驟 2.1-2.7 操作。

1.2 從懸浮細(xì)胞中提取 RNA

1.2.1 細(xì)胞 1,000rpm 離心 5 分鐘,，收集細(xì)胞沉淀,。

1.2.2 細(xì)胞數(shù)量為<5x106個時，加入 500uL 解液 C,。細(xì)胞數(shù)量為 5x106~1x107個時,，加入 700uL 裂解液 C。輕輕吹打混勻,。55C孵育 1分鐘,。

1.2.3 12.000rpm 離心1 分鐘。

1.2.4 細(xì)胞數(shù)量為 5×10 6個時,，取 450μL 上清,。細(xì)胞數(shù)量為 5×10 6~1×10 7個時，取650μL 上清,。

1.2.5 加入 0.5 倍體積無水乙醇,，充分混勻,。按照步驟 2.1-2.7 操作。

1.3 從貼壁細(xì)胞中提取 RNA

1.3.1 胰酶消化細(xì)胞后 1,000rpm 離心 5 分鐘,，收集細(xì)胞沉淀,。

1.3.2 細(xì)胞數(shù)量為<5×10 6個時，加入 500μL 裂解液 C,。細(xì)胞數(shù)量為 5×10 6~1×10 7個時,，加入700μL裂解液 C。輕輕吹打混勻,。55℃孵育 1 分鐘,。 1.3.3 12,000rpm 離心 1 分鐘。 1.2.4 細(xì)胞數(shù)量為><5×10 6個時,，取 450μL 上清。細(xì)胞數(shù)量為 5×10 6~1×10 7個時,，取650μL上清,。1.2.5 加入 0.5 倍體積無水乙醇，充分混勻,。按照步驟 2.1-2.7 操作,。>為<5×10 6個時，取 450μL 上清,。細(xì)胞數(shù)量為 5×10 6~1×10 7個時,，取650μL上清。1.2.5 加入 0.5 倍體積無水乙醇,，充分混勻,。按照步驟 2.1-2.7 操作。

2. RNA 純化

2.1 全部加入 RNA 吸附柱中,，12,000rpm 離心 1 分鐘,，倒掉收集管中廢液。

2.2 向 RNA 吸附柱中加入 500μL 洗滌液 CW1,，12,000rpm 離心 30 ,，倒掉收集管中廢液。

2.3 向 RNA 吸附柱中加入 500μL 洗滌液 CW2,，12,000rpm 離心 30 ,，倒掉收集管中廢液。

2.4 重復(fù)步驟 2.3 一次,。

2.5 12,000rpm 離心 2 分鐘,，倒掉收集管中廢液。

2.6 將 RNA 吸附柱放入無 DNase 無 RNase 離心管中,，加入 30-50μL 洗脫液C,，室溫放置1 分鐘,。

2.7 12,000rpm 離心 2 分鐘，得到 RNA 溶液,，-80℃保存,。

注意事項(xiàng)

1. 務(wù)必在超凈臺中進(jìn)行操作，常換手套,，防止 RNA 降解,。

2. 盡可能使用新鮮樣本進(jìn)行 RNA 提取。

3. 使用無 DNase 無 RNase 的吸頭和離心管,，防止 RNA 降解,，常更換吸頭，防止交叉污染,。

4. 為了提高洗脫效率,，可提將洗脫液 C 置于 65℃水浴后再使用。

5. 根據(jù)后續(xù)試驗(yàn)需求,，請使用 DNase I（貨號 QR0102）進(jìn)行基因組清除,。