一、3D基質(zhì)膠細(xì)胞系細(xì)胞培養(yǎng)套裝（不含酚紅）產(chǎn)品說明

1,、貨號：B-P-00002-2,、B-P-00002-4、B-P-00002-10

2,、規(guī)格：2ml-kit,、4ml-kit 、10ml-kit

3,、儲存條件：常溫運(yùn)輸,，4℃保存，可保存兩年

二,、3D基質(zhì)膠細(xì)胞系細(xì)胞培養(yǎng)套裝（不含酚紅）產(chǎn)品特點(diǎn)

1,、*植物源材料，無任何動物成分；

2,、胺基酸序列*人源化 ,；

3、可調(diào)控基質(zhì)膠硬度進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng),；

4,、3D細(xì)胞/類器官培養(yǎng)種類數(shù)量范圍更廣；

5,、無人畜共通病原菌或毒素風(fēng)險,；

6、適用于醫(yī)療級生物原料,；

7,、高活性、高純度,、可融化,；

8、4度運(yùn)輸,、4度保存,；

9、2年保存時間,；

10,、3D培養(yǎng)結(jié)束后基質(zhì)膠可以溫和融化，并保留3D細(xì)胞/類器官結(jié)構(gòu)完整性,。

三,、應(yīng)用

•三維細(xì)胞球體培養(yǎng)試驗(yàn)

•適合用于三維細(xì)胞藥物篩檢平臺

四、樣本類型

•腫瘤細(xì)胞系

五,、試劑盒組分

六,、使用步驟：

A.試劑制備

A基質(zhì)膠：將A基質(zhì)膠溶于37℃水浴槽回溫10分鐘， 確認(rèn)融解.

C緩沖溶液(1X)制備：使用前將10X C緩沖溶液用冰的無細(xì)胞培養(yǎng)液(例如： 無血清DMEM,、opt-MEM) 制備成 1X C 緩沖溶液,。(不要用 PBS 稀釋 C 緩沖液) .

D 緩沖溶液(1X)制備: 使用前用冷的 1x PBS 稀釋 10X D 緩沖溶液至 1X D 緩沖溶液.

B.Biozellen®3D細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)膠的制備

全部步驟需要在無菌環(huán)境內(nèi)操作，操作步驟如下：

1. 將24孔培養(yǎng)板放置于冰上預(yù)冷,。

2. 細(xì)胞計數(shù)后取 2×105~2×107 細(xì)胞與 0.5 毫升 37℃ 培養(yǎng)基均勻混合,，并與0.5毫升37℃ A膠按照 1:1 等比例均勻混合，最終細(xì)胞密度105~107cells/mL,。

注：請選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)溶液與條件進(jìn)行試驗(yàn),，貼壁細(xì)胞應(yīng)在~80% 匯合度下培養(yǎng)。

3.取 20-40 微升步驟 2 含細(xì)胞的混合 A 膠溶液滴于 步驟 1 預(yù)冷的培養(yǎng)板上,，膠體將于 5 分鐘內(nèi)成膠,。 注: 測試膠體是否成膠,，可用微量吸管尖溫和的觸碰膠體表面進(jìn)行確認(rèn)。

4.待膠體成膠后,，添加1毫升冰的1X C緩沖溶液,，并蓋過步驟3 的膠溶液，固定 15 分鐘,。

5.待15分鐘固定后,，小心的吸取 C 緩沖溶液并置換為適合此細(xì)胞生長之培養(yǎng)基溶液。

6將含有細(xì)胞的膠于37°C 二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行7~14天的培養(yǎng),，并觀察細(xì)胞球體的形成,，按正常培養(yǎng)基更換頻率進(jìn)行更換操作。

C,、溶膠與收集細(xì)胞球體準(zhǔn)備程序

小心的將培養(yǎng)基吸取移除,，并用1X PBS進(jìn)行清洗。

小心的將 1X PBS 吸取移除,，并添加 1 毫升冰的D緩沖溶液,，蓋過膠滴于室溫反應(yīng) 5分鐘。

溫和的用1毫升移液管吸取,，直到膠滴溶解,。

將含有細(xì)胞球體的溶液吸入1.5 毫升離心管,，用1000 rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘,，移除上清液體并收集細(xì)胞球體做分析。

D,、收集單顆細(xì)胞準(zhǔn)備程序

在分離單細(xì)胞前,，先按上述溶膠與收集細(xì)胞球體準(zhǔn)備程序進(jìn)行操作

1. 添加trypsin-EDTA并與收集的細(xì)胞球體于37°C混合反應(yīng)。

2. 用1毫升移液管混合,，直到細(xì)胞體分解,。

3. 待細(xì)胞球體分解，加入3倍體積的1X PBS,，并用1000轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心10分鐘,，并移除上清液體收集沉淀的單細(xì)胞做分析。