一,、人淋巴懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑（Zeta Life）產(chǎn)品介紹

Zeta Life 公司與美國加利福尼亞大學(xué)舊金山校區(qū)聯(lián)合開發(fā)用于哺乳動物細(xì)胞、活體動物轉(zhuǎn)染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑,，此技術(shù)成為新的蛋白功能,、免疫細(xì)胞及干細(xì)胞治療、研發(fā)及生產(chǎn)的主要關(guān)鍵技術(shù)之一,。

二,、產(chǎn)品應(yīng)用

各種細(xì)胞類型中*高的轉(zhuǎn)染效率。

可用于多種真核細(xì)胞系的DNA轉(zhuǎn)染,、siRNA轉(zhuǎn)染和共轉(zhuǎn)染,；

可用于各種原代細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染、siRNA轉(zhuǎn)染,；

可轉(zhuǎn)染極度難轉(zhuǎn)染的免疫細(xì)胞,、懸浮細(xì)胞，如:T細(xì)胞,、NK細(xì)胞,、人淋巴細(xì)胞、THP-1等,；

可高效率轉(zhuǎn)染siRNA到任何哺乳動物細(xì)胞,。

三、產(chǎn)品說明

1,、產(chǎn)品名稱

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2,、包裝規(guī)格

貨號：AD600075

規(guī)格：0.75ml

3、儲存條件

常溫運(yùn)輸,，4℃保存,，可保存兩年，拒絕反復(fù)凍融,。

四,、使用說明

1、材料準(zhǔn)備

RNA 濃度 20 uM /L

質(zhì)粒 DNA 濃度 300 ng-2 ug/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水；②無內(nèi)毒素 ）

2,、操作步驟

提前 1 天接種細(xì)胞：細(xì)胞匯合度在 60-80%左右,，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

核酸復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合,，用移液器吹吸 10-15 次混勻,，室溫靜 止 10-15 分鐘。

在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物：根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物,，并輕輕混勻,；細(xì)胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。

細(xì)胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時后對細(xì)胞進(jìn)行正常換液,，懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液,。

分析結(jié)果：質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達(dá),。若 進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選,，則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,，48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達(dá),。

轉(zhuǎn)染操作示意圖：

轉(zhuǎn)染實驗推薦用量

五、優(yōu)秀表現(xiàn)

Zeta Life多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑的尺寸大小是傳統(tǒng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑體積的1/10;

本轉(zhuǎn)染試劑是通過細(xì)胞內(nèi)?和細(xì)胞主動吸收進(jìn)入細(xì)胞,；

本轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)入后對細(xì)胞膜無物理性損傷,，不易出現(xiàn)細(xì)胞變形，保持高的細(xì)胞活力,；

不激活細(xì)胞表面或細(xì)胞體內(nèi)marker;

可反映真實的細(xì)胞通路蛋白原始數(shù)據(jù),；

可轉(zhuǎn)染免疫細(xì)胞、懸浮細(xì)胞等,。

效果對比圖,，Zeta Life轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率高于Lipo3000、Lipo2000

六,、注意事項

1,、質(zhì)粒 DNA 必須溶解于無菌雙蒸水或超純水，但不能溶解于提取試劑盒提供的 Buffer,。溶解于 Buffer 的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率會下降 80%左右,，甚至?xí)D(zhuǎn)染失敗。

2,、質(zhì)粒必須去除內(nèi)毒素,，內(nèi)毒素對細(xì)胞將產(chǎn)生很大的細(xì)胞毒性，會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率下降 70%-80%左 右,，甚至導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失?。ㄍ扑]使用 Qiagen,、TIANGEN、Omega 去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒）,。

3,、復(fù)合物的制備過程中是絕對不能用其他任何試劑對核酸或轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行稀釋，只需將核酸和轉(zhuǎn)染 試劑兩者按 1:1 比例直接混合,，如果進(jìn)行了稀釋會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失,。

4、轉(zhuǎn)染試劑與核酸混勻后用移液器吹打 10-15 次,，室溫孵育 10-15 分鐘后即可加入細(xì)胞培養(yǎng)板。

5,、轉(zhuǎn)染 24 小時后進(jìn)行正常換液,，不能像 Lipo2000 一樣轉(zhuǎn)染 4-6 小時后換液。

6,、原代細(xì)胞,、免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染時，細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基里面不能含有雙抗培養(yǎng)基,。

七,、成功轉(zhuǎn)染案例圖賞

1、NK細(xì)胞

2,、RAW264.7細(xì)胞

3,、人淋巴 懸浮細(xì)胞

4、A549細(xì)胞

5,、N2a/Neuro-2a小鼠神經(jīng)瘤母細(xì)胞

6,、H9C2大鼠心肌細(xì)胞

Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑系列：

品牌：美國Zeta Life 貨號：AD600025 （Zeta Life原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑）0.25ml

品牌：美國Zeta Life 貨號：AD600050 （Zeta Life真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑）0.5ml

品牌：美國Zeta Life 貨號：AD600075 （Zeta Life可代謝轉(zhuǎn)染試劑）0.75ml

品牌：美國Zeta Life 貨號：AD600150 （Zeta Life免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑）1.5ml

品牌：美國Zeta Life 貨號：AD600500 （Zeta Life懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑）5ml

品牌：美國Zeta Life 貨號：AD601000 （Zeta LifeRAW264.7細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑）10ml

人淋巴懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑（Zeta Life）

Zeta Life介紹：

美國 Zeta Life 公司成立于 1989 年，是國際無血清細(xì)胞培養(yǎng)基 DMEM/F12 主要完成人,，有三十多年的胎牛血清,、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基、以及干細(xì)胞,、免疫細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞等多種不同類型哺乳動物細(xì)胞的無血清培養(yǎng)液生產(chǎn)經(jīng)驗,；也是目前胎牛血清、無血清培養(yǎng)基最大的 OEM 供應(yīng)商之一,；每批血清均有完整的血源證明文件,、獸醫(yī)師檢驗證明及品質(zhì)測試報告；ZETA LIFE 血清在 100 級的無菌間采用全自動方式制造生產(chǎn),，具有良好的可再現(xiàn)性及可追溯性,。 2018 年 Zeta Life 公司與美國加利福尼亞大學(xué)舊金山校區(qū)聯(lián)合開發(fā)用于哺乳動物細(xì)胞、活體動物轉(zhuǎn)染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑,，此技術(shù)成為新的蛋白功能,、免疫細(xì)胞及干細(xì)胞治療、研發(fā)及生產(chǎn)的主要關(guān)鍵技術(shù)之一。