B-P-00002 培養(yǎng)細(xì)胞類型是：細(xì)胞系、腫瘤細(xì)胞,。B-P-00003 培養(yǎng)細(xì)胞類型是：原代細(xì)胞,、干細(xì)胞。

B-P-00002 可做實(shí)驗(yàn)：3D 細(xì)胞球體培養(yǎng)試驗(yàn),、細(xì)胞遷移,、小鼠皮下成瘤。B-P-00003 可做實(shí)驗(yàn)：3D 類器官培養(yǎng),、細(xì)胞侵襲、3D 細(xì)胞球體培養(yǎng)試驗(yàn),、細(xì)胞遷移,、小鼠皮下成瘤。

細(xì)胞分離3D基質(zhì)膠套裝（不含酚紅）產(chǎn)品說明

1,、貨號：B-P-00003-2,、B-P-00003-4、B-P-00003-10

2,、規(guī)格：2ml-kit,、4ml-kit 、10ml-kit

3,、儲存條件：干冰運(yùn)輸,，-20℃保存，可保存一年,。

一,、產(chǎn)品描述

Biozellen®3D類器官培養(yǎng)基質(zhì)膠套裝包含全套膠體試劑與溶解試劑，可進(jìn)行3D類器官培養(yǎng)與微環(huán)境等相關(guān)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用,； 本試劑盒操作便利且可調(diào)控膠體硬度進(jìn)行多種類器官培養(yǎng)測試,；高分子膠體可快速形成水凝膠， 建議操作此培養(yǎng)膠體前詳讀此使用指南,。

（Biozellen®3D類器官培養(yǎng)基質(zhì)膠材料為植物來源,，無動(dòng)物成分）

二、應(yīng)用

• 3D類器官培養(yǎng),。

• 適合用于3D類器官藥物篩檢平臺

三,、適用細(xì)胞種類

• 原代細(xì)胞

• 干細(xì)胞

四、細(xì)胞分離3D基質(zhì)膠套裝（不含酚紅）試劑盒組分

五,、使用步驟：

A.試劑制備

A基質(zhì)膠：將A基質(zhì)膠溶于37℃水浴槽回溫10分鐘,， 確認(rèn)*融解.

C緩沖溶液(1X)制備：使用前將10X C緩沖溶液用冰的無細(xì)胞培養(yǎng)液(例如： 無血清DMEM、opt-MEM) 制備成 1X C 緩沖溶液,。(不要用 PBS 稀釋 C 緩沖液) .

D 緩沖溶液(1X)制備: 使用前用冷的 1x PBS 稀釋 10X D 緩沖溶液至 1X D 緩沖溶液.

B.Biozellen®3D類器官培養(yǎng)基質(zhì)膠的制備

全部步驟需要在無菌環(huán)境內(nèi)操作,，操作步驟如下：

1. 將24孔培養(yǎng)板放置于冰上預(yù)冷,。

2. 細(xì)胞計(jì)數(shù)后取 2×105~2×107 細(xì)胞與 0.5 毫升 37℃ 培養(yǎng)基均勻混合，并與0.5毫升37℃ A膠按照 1:1 等比例均勻混合,，最終細(xì)胞密度105~107cells/mL,。

注：請選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)溶液與條件進(jìn)行試驗(yàn)，貼壁細(xì)胞應(yīng)在~80% 匯合度下培養(yǎng),。

3.取 20-40 微升步驟 2 含細(xì)胞的混合 A 膠溶液滴于 步驟 1 預(yù)冷的培養(yǎng)板上,，膠體將于 5 分鐘內(nèi)成膠。 注: 測試膠體是否成膠,，可用微量吸管尖溫和的觸碰膠體表面進(jìn)行確認(rèn),。

4.待膠體成膠后，添加1毫升冰的1X C緩沖溶液,，并蓋過步驟3 的膠溶液,，固定 15 分鐘。

5.待15分鐘固定后,，小心的吸取 C 緩沖溶液并置換為適合此細(xì)胞生長之培養(yǎng)基溶液,。

6將含有細(xì)胞的膠于37°C 二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行7~14天的培養(yǎng)，并觀察細(xì)胞球體的形成,，按正常培養(yǎng)基更換頻率進(jìn)行更換操作,。

C、溶膠與收集細(xì)胞球體準(zhǔn)備程序

小心的將培養(yǎng)基吸取移除,，并用1X PBS進(jìn)行清洗,。

小心的將 1X PBS 吸取移除，并添加 1 毫升冰的D緩沖溶液,，蓋過膠滴于室溫反應(yīng) 5分鐘,。

溫和的用1毫升移液管吸取，直到膠滴*溶解,。

將含有細(xì)胞球體的溶液吸入1.5 毫升離心管,，用1000 rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘，移除上清液體并收集細(xì)胞球體做分析,。

D,、收集單顆細(xì)胞準(zhǔn)備程序

在分離單細(xì)胞前，先按上述溶膠與收集細(xì)胞球體準(zhǔn)備程序進(jìn)行操作

1. 添加trypsin-EDTA并與收集的細(xì)胞球體于37°C混合反應(yīng),。

2. 用1毫升移液管混合,，直到細(xì)胞體*分解。

3. 待細(xì)胞球體*分解,，加入3倍體積的1X PBS,，并用1000轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心10分鐘，并移除上清液體收集沉淀的單細(xì)胞做分析。