實驗原理

先通過IP得到目的蛋白,，再通過SDS-PAGE對目的蛋白進行分離純化,，將膠條上目的蛋白對應的條帶切下進行膠內(nèi)酶解和高靈敏度的液質(zhì)聯(lián)用分析(LC-MS/MS),，通過數(shù)據(jù)庫檢索得到蛋白上的修飾位點,。

蛋白分析的應用

1. 磷酸化：信號轉(zhuǎn)導、細胞周期,、生長發(fā)育及癌癥機理等,；

2.糖基化：蛋白質(zhì)折疊、更新以及免疫應答等,；

3.乙?；夯虮磉_調(diào)控、細胞凋亡,、細胞代謝,、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性以及神經(jīng)退行性病變等,；

4.泛素化：細胞周期,、細胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控,、DNA修復以及信號轉(zhuǎn)導等,；

5.甲基化：染色質(zhì)結(jié)構(gòu)及轉(zhuǎn)錄調(diào)控等；

6.丙?；?/ 丙二?；?/ 戊二酰化 / 琥珀?；褐饕嬖谟诰€粒體和細菌中,，與代謝過程密切相關。

實驗流程

1.IP溶液/膠條,；

2.蛋白酶消化,；

3.LC-MS/MS分析；

4.搜庫后分析,，蛋白鑒定,、翻譯后修飾分析。

實驗完成周期及交付標準

1. 周期：6周左右

2. 交付標準：質(zhì)譜原始數(shù)據(jù),、白鑒定列表,、肽段信息表、實驗報告（主要儀器,、試劑和實驗方法）

需確認的信息

1. 樣品：如果樣品為蛋白質(zhì)溶液,，蛋白質(zhì)總量≥300mg; 如果是組織樣品,，樣品總量≥0.1g； 如果是細胞樣品,，細胞數(shù)量≥107個,；如果是體液樣品，血清≥200ml,，腦脊液≥200ml,，尿液≥1ml，淚液≥1ml,；

2. 樣品采集過程中使用到塑料制品時,，盡量使用無色進口產(chǎn)品，以減少塑料制品中雜質(zhì)對質(zhì)譜檢測的影響,；

3. 確認樣品所屬種屬,、分析需求。