RAW264.7細胞質(zhì)粒轉染試劑進入細胞后可以被代謝的新型小分子多肽轉染試劑,，對細胞無毒性，不易出現(xiàn)細胞死亡,，不激活細胞免疫機制,。

一、RAW264.7細胞質(zhì)粒轉染試劑產(chǎn)品詳情：

Zeta Life 公司與美國加利福尼亞大學舊金山校區(qū)聯(lián)合開發(fā)用于哺乳動物細胞,、活體動物轉染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉染試劑，此技術成為新的蛋白功能,、免疫細胞及干細胞治療,、研發(fā)及生產(chǎn)的主要關鍵技術之一。Zeta Life轉染試劑可轉染極度難轉染的免疫細胞,、懸浮細胞,，如:T細胞、NK細胞,、人淋巴細胞,、THP-1等；可高效率轉染siRNA到任何哺乳動物細胞;用于將 DNA 和 siRNA 轉染到真核細胞系和各種原代細胞中,；轉染細胞后可10小時內(nèi)快速代謝的第三代新轉染試劑,。

二、產(chǎn)品說明：

1,、產(chǎn)品名稱

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2,、包裝規(guī)格

貨號：AD600025 、AD600050,、AD600075,、AD600150

規(guī)格：0.25ml、0.5ml,、0.75ml,、1.5ml

3、儲存條件

常溫運輸,，4℃保存,，可保存兩年，拒絕反復凍融,。

三,、RAW264.7細胞質(zhì)粒轉染試劑轉染質(zhì)粒大小6000bp效果圖和轉染操作方法

操作方法

提前 1 天接種細胞：細胞匯合度在 60-80%左右，再進行轉染,。

核酸復合物制備：將核酸與轉染試劑按照 1:1 關系直接混合,，用移液器吹吸 10-15 次混勻,，室溫靜 止 10-15 分鐘。

在細胞培養(yǎng)基中加入核酸復合物：根據(jù)參考用量在細胞中加入核酸復合物,，并輕輕混勻,；細胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。

細胞換液：轉染 24 小時后對細胞進行正常換液,，懸浮細胞轉染過程中不用換液,。

分析結果：質(zhì)粒 DNA 轉染 48-72 小時后熒光檢測轉染效率，48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達,。若 進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選,，則在轉染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA 轉染后 9 小時熒光檢測轉染效率,，48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達,。

四、注意事項：

1,、質(zhì)粒 DNA 必須溶解于無菌雙蒸水或超純水,，但不能溶解于提取試劑盒提供的 Buffer。溶解于 Buffer 的質(zhì)粒轉染效率會下降 80%左右,，甚至會轉染失敗,。

2、質(zhì)粒必須去除內(nèi)毒素,，內(nèi)毒素對細胞將產(chǎn)生很大的細胞毒性,，會導致轉染效率下降 70%-80%左 右，甚至導致轉染失?。ㄍ扑]使用 Qiagen,、TIANGEN、Omega 去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒）,。

3,、復合物的制備過程中是絕不能用其他任何試劑對核酸或轉染試劑進行稀釋，只需將核酸和轉染 試劑兩者按 1:1 比例直接混合,，如果進行了稀釋會導致轉染失,。

4、轉染試劑與核酸混勻后用移液器吹打 10-15 次,，室溫孵育 10-15 分鐘后即可加入細胞培養(yǎng)板,。

5、轉染 24 小時后進行正常換液,，不能像 Lipo2000 一樣轉染 4-6 小時后換液,。

6、原代細胞、免疫細胞轉染時,，細胞基礎培養(yǎng)基里面不能含有雙抗培養(yǎng)基,。