蛋白修飾位點(diǎn)分析實(shí)驗(yàn)原理

先通過IP得到目的蛋白,，再通過SDS-PAGE對目的蛋白進(jìn)行分離純化,，將膠條上目的蛋白對應(yīng)的條帶切下進(jìn)行膠內(nèi)酶解和高靈敏度的液質(zhì)聯(lián)用分析(LC-MS/MS),，通過數(shù)據(jù)庫檢索得到蛋白上的修飾位點(diǎn),。

蛋白分析的應(yīng)用

1. 磷酸化：信號轉(zhuǎn)導(dǎo),、細(xì)胞周期,、生長發(fā)育及癌癥機(jī)理等,；

2.糖基化：蛋白質(zhì)折疊、更新以及免疫應(yīng)答等,；

3.乙?；夯虮磉_(dá)調(diào)控、細(xì)胞凋亡,、細(xì)胞代謝,、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性以及神經(jīng)退行性病變等；

4.泛素化：細(xì)胞周期,、細(xì)胞凋亡,、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA修復(fù)以及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等,；

5.甲基化：染色質(zhì)結(jié)構(gòu)及轉(zhuǎn)錄調(diào)控等,；

6.丙酰化 / 丙二?；?span> / 戊二?；?span> / 琥珀酰化：主要存在于線粒體和細(xì)菌中,，與代謝過程密切相關(guān),。

實(shí)驗(yàn)流程

1.IP溶液/膠條；

2.蛋白酶消化,；

3.LC-MS/MS分析,；

4.搜庫后分析，蛋白鑒定,、翻譯后修飾分析,。

實(shí)驗(yàn)完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn)

1. 周期：6周左右

2. 交付標(biāo)準(zhǔn)：質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)、白鑒定列表,、肽段信息表,、實(shí)驗(yàn)報(bào)告（主要儀器,、試劑和實(shí)驗(yàn)方法）

需確認(rèn)的信息

1. 樣品：如果樣品為蛋白質(zhì)溶液，蛋白質(zhì)總量≥300mg; 如果是組織樣品,，樣品總量≥0.1g,； 如果是細(xì)胞樣品，細(xì)胞數(shù)量≥107個(gè),；如果是體液樣品,，血清≥200ml，腦脊液≥200ml,，尿液≥1ml,，淚液≥1ml；

2. 樣品采集過程中使用到塑料制品時(shí),，盡量使用無色進(jìn)口產(chǎn)品,，以減少塑料制品中雜質(zhì)對質(zhì)譜檢測的影響；

3. 確認(rèn)樣品所屬種屬,、分析需求,。