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今天主要來講講熒光定量PCR檢測原理
熒光定量PCR光學(xué)檢測系統(tǒng)：
1,、光源：五個(gè)LED,，各LED激發(fā)波長不同,，保證每個(gè)通道的熒光素由優(yōu)質(zhì)的激發(fā)光激發(fā)。
2,、探測器：CCD,，確保整板同時(shí)檢測，數(shù)據(jù)間可比性強(qiáng),。
3,、激發(fā)波長范圍：475nm-640nm。
4 發(fā)射波長范圍：520nm-740nm,。
5,、五個(gè)檢測通道：可同時(shí)能做四色檢測。
6,、線性范圍：11個(gè)數(shù)量級,。
7、靈敏度：可檢測到單拷貝,。
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。
檢測方法：
1、SYBRGreenⅠ法：
在PCR反應(yīng)體系中,，加入過量SYBR熒光染料,，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號,，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖（單一峰圖表明PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的單一性）,。
2,、TaqMan探針法：
探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收,；PCR擴(kuò)增時(shí),，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成,，實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步,。