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掌握配制培養(yǎng)基制備、滅菌與消毒的一般方法和步驟
閱讀：138 發(fā)布時間：2025-1-10實驗?zāi)康模?.了解培養(yǎng)基的配制原理,；2.掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟。
培養(yǎng)基是人工配制的,，適合微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì),。
原則：目的明確 ;營養(yǎng)協(xié)調(diào);控制PH、滲透壓等條件;經(jīng)濟節(jié)約,。
方法：查閱文獻;精心設(shè)計;試驗比較,。
步驟：稱量、熔化,、調(diào)PH,、過濾、分裝,、加塞,、包扎、滅菌,、冷卻,、無菌檢查。
培養(yǎng)基種類:
碳源,、氮源,、能源、生長因子,、無機鹽,、水。
一,、按成份的不同劃分：天然培養(yǎng)基,、合成培養(yǎng)基,、半合成培養(yǎng)基。
二,、按培養(yǎng)基的物理狀態(tài)劃分：固體培養(yǎng)基,、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基,。
三,、按培養(yǎng)基用途劃分：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基,、鑒別培養(yǎng)基,、選擇培養(yǎng)基。
牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用泛和最普通的細菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基,。其配方如下：
牛肉膏3g，蛋白胨10g,，Nacl5g,，瓊脂15～20g，水1000mL,，PH7.0～7.2(后調(diào)),。
高氏1號培養(yǎng)基：高氏1號培養(yǎng)基是用于分離和培養(yǎng)放線菌的合成培養(yǎng)基。其配方如下：
可溶性淀粉20g,，KNO3 1g,，NaCl 0.5g，K2HPO4·3H2O 0.5g,，MgSO4·7H2O 0.5g,，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.01g，瓊脂15～20g,，水1000mL,，pH7.4～7.6。
查氏合成培養(yǎng)基：查氏合成培養(yǎng)基是用來分類和培養(yǎng)霉菌的培養(yǎng)基,其配方如下：
NaNO3 3g,K2HPO4 1g, KCl 0.5g,
MgSO4.7H2O 0.5g,FeSO4 0.01g,蔗糖 30g, H2O 1000ml,pH自然
麥芽汁培養(yǎng)基：用來培養(yǎng)酵母菌,干麥芽粉加4倍水,在50-60℃保溫糖化3-4小時,，用碘液試驗檢查至糖化*為止,調(diào)整糖液濃度,煮沸后,，過濾，調(diào)pH為6.0,。
消毒與滅菌
消毒：消滅病原菌和有害微生物的營養(yǎng)體,。
滅菌：殺滅一切微生物的營養(yǎng)體，芽胞和孢子,。
方法：
物理的方法：加熱,、過濾、輻射
化學(xué)的方法：用化學(xué)試劑抑制或殺滅微生物,。主要破壞細菌代謝機能,。如重金屬離子,，磺胺類藥物及抗生素等。
加熱法：
干熱法：火焰灼燒滅菌和熱空氣滅菌
1,、火焰灼燒適用于接種環(huán),、接種針和金屬用具如鑷子等，試管口和瓶口,，涂布用玻璃棒,。
2、熱空氣滅菌利用高溫干燥空氣（160－170C）加熱滅菌1－2h,，適用于玻璃器皿和培養(yǎng)皿等,。原理加熱使蛋白質(zhì)變性，與水的含量有關(guān),，當(dāng)環(huán)境和細胞含水量越大,，凝固越快。
3,、注意事項：
1）培養(yǎng)基,、橡膠制品、塑料制品不能用此法,；
2）溫度控制在<180°,；
3）物品不能太擠；
4）溫度降至70°時才開箱門,。
濕熱法 ：
原理：因為濕熱中菌體吸水,，蛋白質(zhì)容易凝固，因蛋白質(zhì)含水量增加,，所需凝固溫度降低,；濕熱的蒸氣有潛熱存在。所以效果比同溫度下干熱好,。
高壓蒸汽滅菌法：
1,、設(shè)備：高壓滅菌鍋
2、時間長短根據(jù)滅菌物品的種類和數(shù)量不同有所變化,。
3,、適用于培養(yǎng)基、工作服,、橡膠物品等的滅菌,，也可用于玻璃器皿的滅菌。
4,、注意事項：
1）冷空氣*排除,；2）加水；3）壓力降為“0"時方可打開,。
在使用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌時,，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否*極為重要,，因為空氣的膨脹壓大于水蒸氣的膨脹壓，所以,，當(dāng)水蒸氣中含有空氣時,，在同一壓力下，含空氣蒸氣的溫度低于飽和蒸氣的溫度,。滅菌鍋內(nèi)留有不同分量空氣時,，壓力與溫度的關(guān)系見表2
壓力與溫度的關(guān)系表
常壓蒸汽滅菌：對于不宜用高壓蒸汽滅菌的培養(yǎng)基如明膠培養(yǎng)基、牛乳培養(yǎng)基,，含糖培養(yǎng)基等可采用此法,。*滅菌則采用間歇滅菌方法。
煮沸滅菌法：適用注射器和解剖器皿,，時間10－15min,。
超高溫殺菌：135-150°C和2-8s對牛乳和其它液態(tài)食品滅菌。
優(yōu)點 ：保持食品價值和營養(yǎng)成分,。
過濾除菌原理：介質(zhì)在有壓力時阻隔微生物,。
適用范圍：許多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此法,。
設(shè)備：蔡氏過濾器，濾膜過濾器,。
優(yōu)缺點：不破壞培養(yǎng)基成分,，只適用少量濾液。
注意事項：1,、壓力適當(dāng),；2、無菌條件下進行,；3,、防止?jié)B透現(xiàn)象。
輻射滅菌原理：紫外線波長在200－300nm,，具有殺菌作用,，以265-266殺菌力強。此段波長易被細胞中核酸吸收,；可產(chǎn)生臭氧和過氧化氫,。殺菌效力與強度和時間的乘積成正比。
缺點：穿透力不大,。距照射物<1.2m為宜,。
應(yīng)用：無菌室，醫(yī)院,。
注意事項：對眼睛和皮膚有刺激作用,。
化學(xué)藥品滅菌原理：應(yīng)用化學(xué)制劑破壞細菌代謝機能,。
殺菌劑如重金屬離子；抑菌劑如磺胺類及多數(shù)抗生素,。
注意：與藥品的濃度高低,，時間長短，微生物種類以及微生物所處的環(huán)境有關(guān),。
常用化學(xué)殺菌劑有：乙醇,、醋酸、石碳酸
福爾馬林,、高錳酸鉀,、新潔爾滅等。
微生物的分離,、純化及培養(yǎng)技術(shù)
分離與純化：從混雜的微生物群體中獲得只含某一種或某一株微生物的過程,。
為什么要進行純培養(yǎng)：平板上的單一菌落并不 一定保證是一種菌。
常用的分離,、純化方法：單細胞挑取法,、稀釋涂布平板法、稀釋混合平板法,、平板劃線法,。
稀釋涂布平板法 ：
步驟： 1、倒平板：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,，高氏I號培養(yǎng)基,，查氏培養(yǎng)基冷卻至55-60℃時，混勻后倒平板,，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基倒4皿,，高氏I號培養(yǎng)基和查氏培養(yǎng)基各倒3皿。2,、制備污水稀釋液：10g土樣,，加入90ml無菌水中，在三角瓶中振搖20min,。取0.5ml 加入盛有4.5ml無菌水的試管中,，以此類推，制成不同稀釋度,。3,、涂布：將上述每種培養(yǎng)基平板底面標記稀釋度，然后用無菌吸管從最后三種稀釋度,，即10-4,、10-5和10-6的試管中吸取0.1ml對號放入平板上，用玻棒涂布。4,、培養(yǎng)：高氏I號和查氏倒置培養(yǎng)于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3-5days,，牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基在37℃培養(yǎng)1-2days。5,、挑菌落：轉(zhuǎn)至斜面,，檢查是否一致，保存,。
平板劃線法：
1,、倒平板，標記培養(yǎng)基名稱,，編號和實驗日期,。
2、劃線方法
稀釋混合平板法 ：
1,、先加菌
2,、倒平板時注意培養(yǎng)基溫度
3、混合均勻,。
微生物培養(yǎng)技術(shù)
1,、斜面接種
2、液體培養(yǎng)基接種
3,、穿刺接種
將已接種的斜面,、半固體和液體培養(yǎng)基放置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)將生長好的菌種用牛皮紙包好，置4℃冰箱中保存,。