化工儀器網(wǎng)
技術文章
掌握培養(yǎng)基制備,、滅菌及無菌檢測技術的過程和方法
閱讀：78 發(fā)布時間：2025-1-9一、實驗目的
1.了解培養(yǎng)基的配置原理
2.掌握其制備過程和方法
二,、實驗原理
培養(yǎng)基是人們按照不同微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的需要而配置的營養(yǎng)基質(zhì),。用于微生物的分離純化培養(yǎng)鑒定和保存菌種。培養(yǎng)基的種類有很多,，按對培養(yǎng)基的組成物質(zhì)的化學成分是否*了解可以分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基,。按照不同微生物對營養(yǎng)的要求，選擇可被迅速利用的碳源,、氮源,、無機鹽及其他營養(yǎng)成分可制成不同的培養(yǎng)基。
三,、實驗器材
1.牛肉膏,、蛋白胨、可溶性淀粉,、NaCI,、K2HPO4、KNO3,、MgSO4FeSO4馬鈴,、蔗糖、瓊脂,、10%NaOH和10%HCI,。
2.刻度搪瓷杯、天平,、牛角匙,、小燒杯、稱量紙,、分裝漏斗,、試管、棉花,、鐵絲筐,、電爐、玻棒,、紗布,。
四、實驗操作
1.稱量：按照培養(yǎng)基配方,，準確稱取各種成分,。
（1）牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基
牛肉膏 3克 蛋白胨 5克
NaCl 5克 瓊脂15-20克
水 1000毫升
PH調(diào)至7.2-7.4 0.1MPa壓力下滅菌30分鐘
?。?）馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）
馬鈴薯 200克 蔗糖(白糖) 20克
瓊脂 15-20克 水1000毫升
去皮洗凈的馬鈴薯按量稱取,，切成小塊,，放在水中煮沸，并維持20一30分鐘,，用雙層紗布過濾得馬鈴薯汁,，補足到定量的水。自然pH值0.1MPa壓力下滅菌30分鐘,。
?。?）高氏一號培養(yǎng)基
可溶性淀粉 20克 KNO3 1克 K2HPO4'3H2O 0.5克 NaCl 0.5克 MgSO4'7H2O 0.5克 FeSO4'7H2O
pH調(diào)至7.2~~7.4先用少量的水將淀粉調(diào)成糊狀后再加水和其他的鹽類。0.1MPa壓力下滅菌30分鐘
2.溶化：
依配方順序,，用少量的水溶解各成分,，有時需加熱溶化，最后補足所需水量,。在暴沸時添加少量的水抑制沸騰,，融化過程需不斷攪拌,。
3.調(diào)整pH：
用PH試紙或酸酸度計先試測初制備培養(yǎng)基的的PH值,，然后用10%NaOH或10%HCⅠ調(diào)整至所需的pH范圍。
4.過濾：
在配制固體培養(yǎng)基時,，事先將瓊脂稱好用冷水浸泡,，洗凈擠干后加人液體培養(yǎng)基中，瓊脂融化的過程中,，需不斷攪拌,，并控制火力，不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦,，待*融化后,，補足水分。
5.分裝：根據(jù)不同的需要,，可將配制的培養(yǎng)基分裝在試管或三角瓶內(nèi),，注意不要將培養(yǎng)基沾染在管口和瓶口上，以免粘住棉塞,，引起污染,。
6.裝棉塞或硅晈塞，棉塞粗細,、長短要求合適,，外面再包一層報紙避免造成污染。
7.滅菌：
培養(yǎng)基的滅菌時間和溫度,，需按各種規(guī)定進行,，保證滅菌數(shù)果和不損失培養(yǎng)基的必要成分。滅菌后的培養(yǎng)基要趁熱擺成斜面,，半固體要垂直放置,，待冷卻即可成為斜面培養(yǎng)基和半固體深層瓊脂培養(yǎng)基，而且必須放在37℃溫箱培養(yǎng)24小時，無菌生長方可使用,。
五,、注意事項
1.牛肉膏的稱取：
用玻璃棒蘸取適量牛肉膏,，抹于稱量紙上,，勿取過量，不足時,，再蘸取少量,，逐步添加；然后將牛肉膏連同稱量紙放入水中,，稍等片刻牛肉膏即從稱量紙上脫落,，用玻璃棒將紙撈出即可。
2.加瓊脂：
瓊脂一般應在調(diào)好了pH后加入,，瓊脂的加入不會影響pH,，加入瓊脂后要控制火力并不斷攪拌，以免沸騰溢出或瓊脂糊底燒焦,。加熱過程中因水分蒸發(fā)而可能使體積減小,，應補充水分至所需量。
3.滅菌前一定要用報紙包扎好,。