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鑒定細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子等炎癥介質(zhì)的分析
閱讀：168 發(fā)布時(shí)間：2024-7-10各種激活類型的細(xì)胞可以分泌細(xì)胞因子,，趨化因子和其他炎癥介質(zhì)，如穿孔素,，粒酶免疫或炎癥反應(yīng)的一部分,。如ELISA和BD?式微珠陣列（CBA）測量整個(gè)細(xì)胞群所產(chǎn)生的分泌蛋白的方法。與此相反,，細(xì)胞內(nèi)流式細(xì)胞儀允許于感興趣的細(xì)胞群,，表型鑒定的個(gè)別類型的細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子等炎癥介質(zhì)的分析。
流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞內(nèi)使得能夠容易地確定是否由激活的細(xì)胞群的細(xì)胞因子的產(chǎn)生的結(jié)果,，產(chǎn)生大量的細(xì)胞因子或一個(gè)人口眾多的細(xì)胞,，每個(gè)細(xì)胞中的細(xì)胞因子生產(chǎn)少量的幾個(gè)單元格。此外,，細(xì)胞內(nèi)流式細(xì)胞儀使得能夠容易地測量多種細(xì)胞因子的同時(shí),，以確定多官能性細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色,，也可用于各種各樣的研究，其中包括B和T細(xì)胞的分化和可塑性,。
通常是由于細(xì)胞因子分泌的蛋白質(zhì),，他們必須先被困在細(xì)胞內(nèi)通過使用蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑。的兩種蛋白質(zhì)運(yùn)輸抑制劑：“莫能菌素A（BD GolgiStop）"（BD GolgiPlug）,。莫能菌素通過互動(dòng)與高爾基體跨膜娜+ + / H +運(yùn)輸,，防止蛋白的分泌，而菌素A再分配順/內(nèi)側(cè)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)高爾基復(fù)合體細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì),。因此,，選擇不同運(yùn)輸?shù)鞍滓种苿┘?xì)胞因子和物種。見表1,。
CD8 +細(xì)胞中的IFN-γ和IL-2產(chǎn)生刺激外周血單核細(xì)胞與金黃色葡萄球菌腸毒素B進(jìn)行6小時(shí)的布雷菲德菌素A的存在刺激后,，細(xì)胞被固定和透性，使用BD Cytofix / Cytoperm的的緩沖液系統(tǒng),。以下的熒光抗體：CD3 FITC,，CD4 PERCP循環(huán)?5.5，CD8艷紫421,，IFN-γ的PE,，和IL-2的APC細(xì)胞染色,。然后洗滌細(xì)胞。最后,，使用BD FACSVerse的?流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞,。
屋宇署已簡化具備完善的工具包，緩沖系統(tǒng),，以及豐富的面板的熒光抗體細(xì)胞因子和細(xì)胞表面標(biāo)志物的檢測,。多種熒光染料偶聯(lián)的表面標(biāo)志物和細(xì)胞因子的抗體。這使得在染色面板設(shè)計(jì)的靈活性,，支持高含量多色流式細(xì)胞儀分析,，以獲得最珍貴的細(xì)胞樣本數(shù)據(jù)。
BD FastImmune?套件包含熒光抗體測試的雞尾酒,，適當(dāng)?shù)牡鞍踪|(zhì)運(yùn)輸抑制劑,，兼容的緩沖區(qū)，作的準(zhǔn)備和詳細(xì)的協(xié)議,，染色,，產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞從全血的檢測。板載檢測BD FACSVerse流式細(xì)胞儀系統(tǒng)進(jìn)一步簡化這個(gè)過程,。BD Cytofix / Cytoperm的緩沖已被成千上萬的出版物引用,，產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞通過流式細(xì)胞儀分析。研究人員選擇自己的細(xì)胞因子的利息蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑使用BD Cytofix / Cytoperm的緩沖系統(tǒng),，固定,，通透和細(xì)胞染色，流式細(xì)胞儀分析,。
抗原特異性IFN-γ產(chǎn)生由巨細(xì)胞病毒（CMV）的pp65抗原刺激的CD4 + CD69 + T淋巴細(xì)胞雙色流式細(xì)胞儀散點(diǎn)圖表明IFN-γ的CD4和CD69的表達(dá)被未受刺激的T細(xì)胞（左圖）,，SEB刺激（作為陽性對(duì)照，中心板）,，CMV pp65抗原刺激（右圖）的樣品從兩個(gè)捐助者,。人類全血刺激菌素A定影之前，透,，染色使用BD FastImmune?3色CD4細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測試劑盒的存在,。使用BD流式細(xì)胞儀FACSVerse和的BD FACSuite?軟件研發(fā)試驗(yàn)獲得的數(shù)據(jù)。