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多色流式細胞術(shù)是一種強大的技術(shù),，用于分析細胞內(nèi)特定的細胞類型中表達的蛋白質(zhì)。對于許多類型的細胞,，如Th17細胞,，細胞表面和細胞內(nèi)標記物的結(jié)合使用是必要的明確的表型鑒定,。表征信號響應(yīng)于特定的靶細胞的性質(zhì),，可用于表面標志物的同時分析和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白。

　　細胞表面染色的技術(shù)是比較標準的,，往往依賴于目標蛋白的生物學(xué)細胞內(nèi)標記物的染色,。根據(jù)在細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)的位置，與其他分子，它的穩(wěn)定性,，不同的細胞制備和染色方法的建議,。細胞因子，例如,，典型的分泌蛋白,。但是,，如果它們在細胞內(nèi)被困住的,，它們可以被污染：BD GolgiStop的?（含莫能菌素）或BD GolgiPlug的?（含布雷菲德菌素甲）如使用蛋白轉(zhuǎn)運抑制劑作為細胞內(nèi)蛋白質(zhì)。細胞因子是相對使用的溫柔固定和通透賦予由BD Cytofix / Cytoperm?固定和透化解決方案訪問,。

　　相反,，細胞因子，轉(zhuǎn)錄因子通常被定位在細胞核內(nèi)DNA和其他蛋白質(zhì)結(jié)合,。一些蛋白質(zhì)的磷酸化,，如Stat5的，導(dǎo)致二聚體的形成,，還掩蓋了磷酸化的表位,。此外，細胞內(nèi)磷酸酶可以快速去磷酸化蛋白,。因此，處理后的細胞,，必須迅速地固定,，并進行更強的通透條件允許抗體進入細胞核并進入破壞的分子復(fù)合物的抗原表位內(nèi),。

　　所用的透化技術(shù)產(chǎn)生負面影響的細胞表面和其他細胞內(nèi)抗原的檢測。允許進入細胞核,，并打開DNA /蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)/蛋白質(zhì)復(fù)合物的相同的技術(shù)往往能細胞表面抗原變性,，防止其被抗體的檢測。雖然不同的細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的檢測可能需要不同的條件,，基本原則是相同的：細胞是固定的,，通透的，然后用熒光抗體染色細胞,。

　　細胞固定和通透（象征虛線膜）,，染色,，然后用流式細胞儀分析。對于分泌的蛋白質(zhì)的研究中,，細胞首先與一種蛋白轉(zhuǎn)運抑制劑治療的目標蛋白在細胞內(nèi)的積累,，以允許..

　　為了促進BD流式細胞儀檢測細胞內(nèi)，已經(jīng)開發(fā)了幾個包,，緩沖區(qū)和協(xié)議,。此外，許多關(guān)鍵的細胞表面標志的特定熒光抗體測試幾個緩沖系統(tǒng)，以節(jié)省研究人員的時間，樣品,，和金錢。常用的為特定的應(yīng)用程序的BD緩沖器包括：

　　BD Cytofix / Cytoperm的固定/通透的解決方案（編號：554722）是適用于染色大多數(shù)細胞因子和細胞表面標志,。該緩沖系統(tǒng)也可用于一些轉(zhuǎn)錄因子和其它細胞內(nèi)蛋白染色。該緩沖系統(tǒng)包含溫和的洗滌劑以及與甲醛固定液,。

　　是專為BD Pharmingen公司的轉(zhuǎn)錄因子的緩沖液設(shè)置（部件號五十六萬二千七百二十五分之五十六萬二千五百七十四）單獨或結(jié)合細胞表面標志物和細胞因子的轉(zhuǎn)錄因子染色,。該緩沖系統(tǒng)包含溫和的洗滌劑以及與甲醛固定液。

　　BD Phosflow?燙發(fā)緩沖III（貨號：558050）推薦的通透緩沖通過流式細胞儀phosphoepitope檢測,。彼爾姆緩沖III是一個嚴酷的以酒精為基礎(chǔ)的緩沖區(qū),。也可替代通透性緩沖區(qū)，以適應(yīng)特定的實驗要求,。

　　磷酸701表位（橙色）位于的STAT蛋白二聚體,，而磷酸絲氨酸727表位是位于外二聚化地區(qū)。對于的磷酸701網(wǎng)站,，如燙發(fā)緩沖III染色所需的更嚴厲的緩沖,。以誘導(dǎo)蛋白的磷酸化，人外周血單核細胞（PBMCs）被留下未處理的（ - ）或（+）激活的人IFN-α（急性髓pY701）或PMA（急性髓pS727）,。細胞被固定使用BD Cytofix?固定緩沖通透使用BD Phosflow?燙發(fā)緩沖區(qū)I,，II，III,，IV,，染色前用熒光磷酸化抗體。