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真菌保藏的基本原理及保藏工藝的要點
閱讀：479 發(fā)布時間：2023-3-29真菌研究及其生物工業(yè)的發(fā)展,，必然和安全、長效的保藏技術方法聯(lián)系,，對于有重要經濟價值的菌株來說,，其保藏技術處理和保藏過程中生理、基因性狀的損害,、變異，將會帶來巨大損失,。真菌種類的多樣性異常豐富,，據估計存在150萬種真菌（Hawksworth, 1991），而還不到5%的真菌被描述,，只有很少的種類有合適保藏的工藝技術（Ryan,，2000）,，且保藏效果存在菌株水平上的差異性。本文針對近幾年真菌保藏領域采取的新技術,、原理及適用的保藏研究對象進行了概述,。
1、真菌保藏的基本原理及保藏工藝的要點
微生物保藏的最終目的是保持菌株的純度,、活性、基因信息的完整性,、避免菌株變異和降低退化,。多種保藏技術方法適用于真菌的保藏，大體可以分為三類(Smith et al, 2001)：
一是讓真菌連續(xù)生長的保藏技術,。這一類的保藏技術的特點是不斷的將菌株移植在新鮮的培養(yǎng)基上，并在合適的條件下生長,，隨后至于一個低溫的環(huán)境中,，一般是4-10℃，這類保藏技術主要包括斜面移植,、油管保藏和蒸餾水保藏等方法。
二是利用干燥環(huán)境保藏菌株的休眠體,，如分生孢子、厚垣孢子等,，干燥選用的基質可以是空氣,、硅膠、土壤,、沙子等,。
三是利用抑制菌株代謝活性的辦法達到長期保藏,，一般是通過脫水降低細胞內水分或低溫冷凍，在此過程中關鍵環(huán)節(jié)是避免和降低冰晶細胞造成的傷害,，這類保藏工藝包括冷凍干燥法,、低溫凍結和液氮保藏法等。
各種保藏方法優(yōu)劣比較如下：
表1 各保藏技術方法的優(yōu),、缺點及保藏周期（引自Ryan & Smith, 2004）
保藏方法 | 優(yōu)點 | 缺點 | 保藏周期 |
斜面移植法 | 方法直接,花費較少 | 轉接周期短,污染風險 菌株易變異 | 14d-1年 |
油管保藏法 | 方法直接,花費較少 | 菌株退化,污染風險 菌株易變異 | -10年 |
蒸餾水保法 | 方法直接,花費較少 | 菌株退化,污染風險 菌株易變異 | -10年 |
沙土管保法 | 方法直接,花費較少 | 濕度大時易惡化 保藏內容物太多 | -10年 |
硅膠保藏法 | 方法直接,花費較少 | 硅膠有毒性影響 只能保存產孢子的真菌 | -25年 |
冷凍干燥法 | 長時間保藏 容易儲藏及發(fā)放 | 方法復雜,，耗時較長,，設備較貴，不適用于不產孢的真菌 | -50年 |
低溫凍結法 （超低溫冰箱保藏） | 方法直接 降低菌株變異 | 設備較貴,，必須有電力不間斷供應,，一些低溫保護劑可能對真菌有毒性 | -40年 |
液氮保藏法 | 適用于大多數真菌,，針對不同的屬可以最大優(yōu)化處理,，降低菌株變異 | 設備昂貴,，控制降溫速率，必須保證液氮的充足供應,，降低菌株變異 | 無限期 |
注：保藏周期指多數情況,，特例除外。
真菌的長期保藏要保證菌株的生理性狀和遺傳信息的完整性（Ryan & Smith, 2003）,，而保藏過程中僅以活性指標判斷真菌的是否保藏完好有些片面,。Kuhls & Borner (1995) 研究來自不同菌種保藏中心的同一個Trichoderma sp菌株時，再在PCR-指紋檢測結果中出現了偏差（Kuhls & Borner , 1995),。Kelly等(1994）將保藏了12年的Fusarium oxysporium f.sp.ciceris 和這一種的其他菌株比較,，發(fā)現該菌株沒有顯現出典型的分子指紋特征，證實該菌株已發(fā)生退化,。Horgen等 (1996) 證實了Agaricus bisporus 的不同傳代菌株出現染色體異常和RFLP指紋的多型性。一些沒有經過*化保藏程序的Metarhizium anisopliae 菌株處理,，其PCR分子指紋證據顯示出了多型性的特征,，報道M. anisopliae 菌株經過連續(xù)傳代培養(yǎng)后，出現“角變"并伴隨著一些生理性狀的變化（Ryan et al., 2002）,。Santors 等（2002） 報道Penicillum expansum 長期保藏后的菌株產棒曲霉素（patulin）和橘霉素（citrinin）的功能受到影響。