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熒光分光光度計(jì)的使用方法,、功能用途與分類
閱讀：2521 發(fā)布時(shí)間：2021-11-16熒光分光光度計(jì)基本原理
由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍(lán)紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中,，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光,，熒光經(jīng)過濾過和反射后，被光電倍增管所接受,，然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來(lái),。 物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子 吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出，從而產(chǎn)生熒光.
不同物質(zhì)由于分子 結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能級(jí)的分布具有各自不同的特征,，這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜;,，因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來(lái)定性地進(jìn)行物質(zhì)的鑒定。
在溶液中,，當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度較低時(shí),其熒光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系,即IF=KC,利用這種關(guān)系可以進(jìn)行熒光物質(zhì)的定量分析,與紫外-可見分光光度法類似,，熒光分析通常也采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行。
熒光分光光度計(jì) 基本結(jié)構(gòu)
1. 光源：
為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈,，后者能發(fā)射出強(qiáng)度較大的連續(xù)光譜,，且在300nm～400nm 范圍內(nèi)強(qiáng)度幾乎相等，故較常用,。
2.激發(fā)單色器：
置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或第一單色器,，篩選出特定的激發(fā)光譜。
3.發(fā)射單色器：
置于樣品室和檢測(cè)器之間的為發(fā)射單色器或第二單色器,，常采用光柵為單色器,。篩選出特定的發(fā)射光譜。
4. 樣品室：
通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成,。測(cè)量液體時(shí),，光源與檢測(cè)器成直角安排;測(cè)量固體時(shí)，光源與檢測(cè)器成銳角安排,。
5. 檢測(cè)器：
一般用光電管或光電倍增管作檢測(cè)器,?？蓪⒐庑盘?hào)放大并轉(zhuǎn)為電信號(hào)。
熒光分光光度計(jì)功能特點(diǎn)
1. 熒光發(fā)射光譜
選擇某一固定波長(zhǎng)的光激發(fā)樣品,，記錄樣品中產(chǎn)生的熒光發(fā)射強(qiáng)度與發(fā)射波長(zhǎng)間的函數(shù)關(guān)系，即得熒光發(fā)射光譜,。
2. 熒光激發(fā)光譜
選定某一熒光發(fā)射波長(zhǎng)記錄熒光發(fā)射強(qiáng)度作為激發(fā)光波長(zhǎng)的函數(shù),，即得熒光激發(fā)光譜。
3.時(shí)間分辨技術(shù);
可用于對(duì)混合物中光譜重疊但有壽命差異的組分進(jìn)行分辨并分別測(cè)量,。
時(shí)間分辨熒光測(cè)定公式如下：
P(t) = P0 EXP (-t /τ)
式中P(t)：擬合指數(shù)函數(shù)
P0：強(qiáng)度取值
EXP：指數(shù)運(yùn)算符
t：時(shí)間取值
τ：熒光平均時(shí)間壽命
熒光分光光度計(jì)產(chǎn)品應(yīng)用
對(duì)經(jīng)光源激發(fā)后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)或經(jīng)化學(xué)處理后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)成份分析,，可應(yīng)用于生物化學(xué)、生物醫(yī)學(xué),、環(huán)境化工等部門,。
熒光分光光度計(jì)分類
熒光光譜法具有靈敏度高、選擇性強(qiáng),、用樣量少,、方法簡(jiǎn)便、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點(diǎn),，可以廣泛應(yīng)用于生命科學(xué),、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)和藥理學(xué),、有機(jī)和無(wú)機(jī)化學(xué)等領(lǐng)域,。
熒光分光光度計(jì)的發(fā)展經(jīng)歷了手控式熒光分光光度計(jì)，自動(dòng)記錄式熒光分光光度計(jì),，計(jì)算機(jī)控制式熒光分光光度計(jì).
光分光光度計(jì)三個(gè)階段;熒光分光光度計(jì)還可分為單光束式熒光分光光度計(jì)和雙光束式熒光分光光度計(jì)兩大系列,。其他的還有低溫激光Sh p ol’skill熒光分光光度計(jì)，配有壽命和相分辯測(cè)定的熒光分光光度計(jì)等,。
經(jīng)過上述的逐步分析闡述,，我們了解熒光分光光度計(jì)的工作原理就不難了。最后再提供下小意見,，當(dāng)初我們實(shí)驗(yàn)室用的是奧林巴斯的熒光分光光度計(jì),。