化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
在特定的培養(yǎng)基中細(xì)菌種類(lèi)有其特征性的生長(zhǎng)表現(xiàn)
閱讀：2810 發(fā)布時(shí)間：2021-9-28每一種微生物都有其特殊的生物學(xué)特性,，細(xì)菌在適宜的生長(zhǎng)條件下,，在特定的培養(yǎng)基中有其特征性的生長(zhǎng)表現(xiàn)，可作為鑒定細(xì)菌種類(lèi)的依據(jù),。
[目的要求]
(1)了解細(xì)菌的菌落形態(tài)及其在各種培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)表現(xiàn),。
(2)了解培養(yǎng)性狀對(duì)細(xì)菌鑒別的重要意義。
(3)掌握檢查細(xì)菌運(yùn)動(dòng)力的幾種方法,。
(4)區(qū)別細(xì)菌的真正運(yùn)動(dòng)和受外力作用的擺動(dòng)或移動(dòng),。
[實(shí)驗(yàn)材料]
(1)葡萄球菌、炭疽桿菌,、巴氏桿菌,、豬丹毒桿菌的普通平板或鮮血(血清)平板、斜面,、瓊脂穿刺及明膠穿刺培養(yǎng)物,。
(2)馬鏈球菌馬亞種、綠膿桿菌,、葡萄球菌,、大腸桿菌(Escherichia coli)、炭疽桿菌的肉湯培養(yǎng)物,，厭氧梭菌的熟肉培養(yǎng)基培養(yǎng)物,。
(3)大腸桿菌(Escherichia coli)、葡萄球菌的半固體穿刺培養(yǎng)物。
(4)凹玻片,、凡士林等,。
[細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)表現(xiàn)]
1．瓊脂平板上的生長(zhǎng)表現(xiàn)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)繁殖，可形成肉眼可見(jiàn)的菌落,。各種細(xì)菌的菌落,，按其特征的不同，可以在一定程度上進(jìn)行鑒別,。例如,，葡萄球菌在瓊脂平皿上，由于產(chǎn)生色素的不同,，形成各種顏色的圓形而突起的菌落,；炭疽桿菌形成扁平、干燥,、邊緣不整齊的波紋狀菌落,，用放大鏡觀察時(shí)，呈卷發(fā)樣,；腸道桿菌屬的細(xì)菌,，形成圓形、濕潤(rùn),、黏稠,、扁平、大小不等之菌落,；巴氏桿菌和豬丹毒桿菌,，形成細(xì)小露珠狀菌落。菌落的觀察方法除肉眼外,，可用放大鏡,，必要時(shí)也可用低倍顯微鏡進(jìn)行檢查。觀察的主要內(nèi)容有：
大小菌落的大小,，規(guī)定用毫米(mm)表示,，一般不足1mm者為露滴狀菌落,，1～2mm者為小菌落,；2～4mm者為中等大菌落,；4～6mm或更大者稱為大菌落、巨大菌落,。
形狀菌落的外形有圓形,、不正形、根足形,、葡萄葉形,。
邊緣菌落邊緣有整齊,、鋸齒狀、網(wǎng)狀,、樹(shù)葉狀,、蟲(chóng)蝕狀、放射狀等,。
表面性狀觀察其表面平滑,、粗糙、皺襞狀,、旋渦狀,、荷包蛋狀，甚至有子菌落等(圖6-1),。
隆起度表面有隆起,、輕度隆起、中央隆起,，也有陷凹或堤狀者(圖6—2),。
顏色及透明度菌落有無(wú)色、灰白色,，有的能產(chǎn)生各種色素,；菌落是否光澤、透明,、
透明及不透明。
硬度黏液狀,、膜狀,、干燥或濕潤(rùn)等。
溶血若是鮮血瓊脂平皿,，應(yīng)看其是否溶血,，溶血情況怎樣。
2．瓊脂斜面上生長(zhǎng)表現(xiàn)將各種細(xì)菌分別以接種針直線接種于瓊脂斜面上(自底部向上劃一直線),，培養(yǎng)后觀察其生長(zhǎng)表現(xiàn),，如圖6—3所示各種生長(zhǎng)方式。
3．瓊脂柱穿刺培養(yǎng)中的生長(zhǎng)表現(xiàn)將各種細(xì)菌分別以接種針穿刺接種于瓊脂柱中,，培養(yǎng)后觀察其生長(zhǎng)表現(xiàn),，如圖6—4所示各種生長(zhǎng)方式。
[細(xì)菌在明膠穿刺培養(yǎng)中的生長(zhǎng)表現(xiàn)]
取大腸桿菌(Escherichia coli),、枯草桿菌和其他多種細(xì)菌分別以接種針穿刺接種于明膠柱,，置22℃溫箱中培養(yǎng)后觀察其液化與否和液化的情況。細(xì)菌對(duì)明膠柱的液化作用,，其形式如圖6—5所示,。
[細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)表現(xiàn)]
1．肉湯中生長(zhǎng)表現(xiàn)將馬鏈球菌馬亞種,、綠膿桿菌、葡萄球菌,、大腸桿菌(Escherichia coli),、炭疽桿菌等分別接種于肉湯中，培養(yǎng)后觀察其生長(zhǎng)情況,，注意其混圖6—5細(xì)菌明膠柱穿刺培養(yǎng)生長(zhǎng)表現(xiàn)濁度,、沉淀物、菌膜,、菌環(huán)和顏色等(圖6—6),。
細(xì)菌在肉湯中所形成的沉淀有：顆粒狀沉淀、黏稠沉淀,、絮狀沉淀,、小塊狀沉淀,。另外還有不生成沉淀的菌種,。
2．細(xì)菌在熟肉培養(yǎng)基中生長(zhǎng)表現(xiàn)取各種厭氧梭菌分別接種于熟肉培養(yǎng)基中,，培養(yǎng)后觀察其生長(zhǎng)表現(xiàn),，注意其混濁度,、沉淀,、碎肉的顏色和碎肉塊被消化的情況。
[細(xì)菌運(yùn)動(dòng)力的檢查]
1．顯微鏡直接檢查法一部分細(xì)菌具有運(yùn)動(dòng)能力,，可以獨(dú)立運(yùn)動(dòng),；另一些細(xì)菌則沒(méi)有運(yùn)動(dòng)的性能,。在顯微鏡下觀察,，細(xì)菌的真正運(yùn)動(dòng)(自動(dòng)運(yùn)動(dòng))表現(xiàn)為能離開(kāi)原來(lái)位置,，不斷改變方向的自由地游動(dòng)。水的分子運(yùn)動(dòng)(布朗運(yùn)動(dòng))也能見(jiàn)于細(xì)菌個(gè)體,，使其在原地?cái)[動(dòng),，但不能遠(yuǎn)離原來(lái)位置移動(dòng),。這種情況，都是外力作用的結(jié)果,，不是細(xì)菌本身的真正運(yùn)動(dòng)。檢查細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)力,，應(yīng)用幼年培養(yǎng)物,，最好剛從溫箱中取出，并在溫暖的環(huán)境下從速進(jìn)行,。
懸滴檢查法
制片：取潔凈的凹玻片一塊，于其凹窩的四周整齊地涂以適量的凡士林。另取潔凈蓋玻片一塊,，用接種環(huán)于其中央滴上一小滴生理鹽水或透明肉湯,，再用接種環(huán)取待檢固體培養(yǎng)物少量(不要過(guò)多),，混勻于液滴內(nèi),；如為液體檢材,，可直接用接種環(huán)取一滴于蓋玻片上,，取起并翻轉(zhuǎn)蓋玻片,，使液滴向下,，以其對(duì)角線垂直于載玻片四邊的位置,，輕輕蓋在凹玻片的凹窩上,，略加輕壓,，使蓋玻片四周與凡士林密著,，封閉凹窩,，即可進(jìn)行鏡檢(或者將載玻片取起翻轉(zhuǎn)，使凹窩對(duì)正蓋玻片上液滴罩下,，輕壓,，使與凡士林密著，封閉凹窩,，并粘著蓋玻片,，然后再將玻片一起翻轉(zhuǎn)，即可進(jìn)行鏡檢),。
用凡士林封閉凹窩的主要目的,，在于防止液滴干燥，可供較長(zhǎng)時(shí)間觀察,；而使蓋玻片如上述位置放置,，則便于放上和取下，如用蠟筆劃好分格,，則可在一塊蓋玻片上作2～3個(gè)懸滴點(diǎn)(如只作短時(shí)間觀察,，亦可不用凡土林，而在凹窩四周以水濕潤(rùn),，甚至水也不用,，光是蓋上蓋玻片即用)，如圖（6-7）所示,。
鏡檢：顯微鏡要放在平坦,、穩(wěn)固之處，不能傾斜或震動(dòng),，放上懸滴標(biāo)本片后,，先用低倍鏡找到液滴，移至視野中央,，然后轉(zhuǎn)換高倍鏡和調(diào)整光線(宜稍暗),，對(duì)焦觀察，一般不必使用油鏡觀察,，必須用時(shí),，注意防止壓壞蓋玻片。
壓滴檢查法本法比較簡(jiǎn)便,，宜于短時(shí)觀察,，也較適用于混濁或濃厚的液體檢材(如血液,、滲出液、膿汁,、稀糞便等)。
制片：取一塊潔凈的普通載玻片,，于其中央滴上一滴(可以稍大些)生理鹽水,，以接種環(huán)取少量固體檢材混勻其中。如為液體檢材,，可以直接滴在載玻片上,，然后取一個(gè)潔凈的蓋玻片，輕輕蓋壓在液滴上,，要注意避免產(chǎn)生氣泡,。
鏡檢：同懸滴檢查法。
暗視野檢查法
制片：與壓滴檢查法同,，但只能應(yīng)用不超過(guò)1.5mm厚度的薄載玻片,，否則暗視野集光器的斜射光交點(diǎn)，將不能調(diào)整至標(biāo)本液滴中,，而只能落在下面(載玻片內(nèi)),，這就不能觀察運(yùn)動(dòng)標(biāo)本的影像。
鏡檢：暗視野鏡檢方法見(jiàn)實(shí)驗(yàn)一,。
2．培養(yǎng)檢查法
(1)半固體培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)法：以滅菌接種針蘸取純培養(yǎng)檢材,，垂直刺進(jìn)半固體培養(yǎng)基的瓊脂柱中間直至管底，置37℃溫箱中培養(yǎng)18～24h,，四周擴(kuò)散生長(zhǎng),，使周?chē)呐囵B(yǎng)基變成混濁；無(wú)運(yùn)動(dòng)力的細(xì)菌僅能沿穿刺線生長(zhǎng),，周?chē)呐囵B(yǎng)基仍然保持澄清(圖6—8),。
(2)平板挖溝培養(yǎng)法：預(yù)先制備好鮮血瓊脂平板，以無(wú)菌手術(shù)在平板中央挖去一條lcm寬的瓊脂條,，形成一條小溝,，放置一條4cm×0.5cm的無(wú)菌濾紙橫跨于兩邊培養(yǎng)基上，使之與小溝相垂直,。在濾紙條的一頂端接種待檢細(xì)菌的純培養(yǎng)物,，置37℃溫箱中培養(yǎng)，每天觀察生長(zhǎng)情況,，直至7天,，如接種端的隔溝對(duì)邊亦生長(zhǎng)同樣細(xì)菌，表示該菌有運(yùn)動(dòng)力,。
[細(xì)菌大小的測(cè)定]
測(cè)量細(xì)菌的大小,，以微米(μm)為單位,，1μm = 1/1000mm。測(cè)量細(xì)菌大小的裝置稱為測(cè)微計(jì),，它由接目測(cè)微尺和接物測(cè)微計(jì)兩部分組成,。
1．接目測(cè)微尺為一個(gè)圓形玻片，其中央部刻有50～100個(gè)等分小格,，小格的長(zhǎng)度不定,，隨接目鏡與接物鏡的放大倍數(shù)不同而異。因此在測(cè)量細(xì)菌大小之前,，須應(yīng)用接物測(cè)微計(jì)來(lái)確定每一小格的長(zhǎng)度,。使用時(shí)將接目測(cè)微尺裝入接目的鏡筒內(nèi)。
2．接物測(cè)微計(jì)為一載玻片,，在玻片的中央,，粘著一圓形小玻片，在其上刻有100個(gè)小格,，每一小格的長(zhǎng)度為10μm,，所以全長(zhǎng)為1mm(1 000μm)。
3．測(cè)量法先用低倍鏡找到接物測(cè)微計(jì)的小格,，然后換油鏡使接目測(cè)微尺與接物測(cè)微計(jì)的小格重疊,。借以求出接目測(cè)微尺中一個(gè)小格的絕對(duì)值。
例如接目測(cè)定微尺的7小格與接物測(cè)微計(jì)的一小格重疊時(shí),，則接目測(cè)微尺一小格的值為7：10：1：X,，X=1.43，即一小格為1.43μm,。
然后取下接物測(cè)微計(jì),，放在欲測(cè)大腸桿菌(Escherichia coli)染色標(biāo)本。檢查標(biāo)本上的細(xì)菌的長(zhǎng),、寬相當(dāng)于接目測(cè)微計(jì)上的幾小格,，即為細(xì)菌體的大小。