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測量任一細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄因子的其他技術(shù)
閱讀：498 發(fā)布時間：2021-4-14雖然其他技術(shù)可以測量任一細(xì)胞因子,，轉(zhuǎn)錄因子，或另外的磷酸化蛋白質(zhì),，細(xì)胞內(nèi)流式細(xì)胞儀可以測量多個細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記同時上面的singlecell電平,。這種方法提供了數(shù)據(jù)信號反應(yīng)，分化狀態(tài),，和其他細(xì)胞活動,。特定的細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記物的熒光抗體的結(jié)合使用使高分辨率的樣本之間的多種細(xì)胞類型內(nèi)的表型和功能的差異比較分析。
在所示的例子中,，從人全血中的細(xì)胞進(jìn)行分析的Stat5的磷酸化誘導(dǎo)的IL-2刺激,。確定了使用不同人群的天真，效應(yīng)和記憶性T細(xì)胞表型標(biāo)記,。除了 細(xì)胞表面標(biāo)志物,，表型分析中T-bet，簽名參與γ-干擾素的產(chǎn)生,，和已知的表達(dá)在NK細(xì)胞,，CD8 +效應(yīng)T細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子的幫助下，CD4 + T輔助細(xì)胞1（Th1細(xì)胞）細(xì)胞,。1,2
在這個實驗中,，在IL-2的靈敏度的差異，觀察在不同類型的細(xì)胞,。例如,，Th1細(xì)胞等和非Th1細(xì)胞效應(yīng)/記憶CD4 + T細(xì)胞亞群（種群F和E，分別）與非常低濃度的IL-2的刺激,，中藥標(biāo)準(zhǔn)對照品網(wǎng)整理提供而幼稚的CD4 + T細(xì)胞（人口D）和幼稚CD8 T細(xì)胞（人口）需要更高劑量的IL-2誘導(dǎo)STAT5磷酸化,。
人全血刺激后不同濃度的人重組IL-2（0.05?100毫微克/毫升）15分鐘。細(xì)胞固定BD Phosflow?裂解/修復(fù)緩沖區(qū),，通透與BD Phosflow的燙發(fā)緩沖III,，染色，熒光抗體具體CD3,，CD4,，CD45RA，,，和Stat5（pY694）,。使用BD LSR II流式細(xì)胞儀系統(tǒng)用Cytobank軟件樣品進(jìn)行了分析。T細(xì)胞亞群被確定,，如圖所示,。
同時測量多個轉(zhuǎn)錄因子,，細(xì)胞因子，和在同一個樣品的細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)水平的T輔助細(xì)胞（Th）細(xì)胞的分化和功能的研究是非常有用的,。RORγt的簽名Th17細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子,。重要的是為1,2分泌的IL-17和維持CD4 + CD8 +雙陽性胸腺細(xì)胞。
所示的實驗結(jié)果,，從BALB / c小鼠胸腺和脾臟細(xì)胞中分離,。胸腺細(xì)胞或脾細(xì)胞表面熒光抗體染色，具體CD62L,，CD44,，CD196，或適當(dāng)?shù)拿庖咔虻鞍淄蛯φ?。?xì)胞固定和透BD Pharmingen公司的轉(zhuǎn)錄因子的緩沖液設(shè)置和RORγt的,，F(xiàn)oxp3的，IL-17特異的熒光抗體染色,，然后在細(xì)胞內(nèi),，和IFN-γ。
頂部面板中的細(xì)胞表達(dá)IL-17A較RORγt的表達(dá),，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子Foxp3（上）和IFN-γ（Th1細(xì)胞因子）,。正如預(yù)期的那樣在胸腺細(xì)胞，有許多IL-17A +RORγt的+雙陽性細(xì)胞,，而基本上沒有共表達(dá)Foxp3的或IFN-γ與IL-17A,。脾細(xì)胞表達(dá)IL-17A很少。
底部面板中的（B）,，進(jìn)一步的分析表明,，從脾臟表達(dá)的IL-17產(chǎn)生細(xì)胞的表面標(biāo)志物CD44和CD196（CCR6），但不是CD62L,，IL-17 +細(xì)胞的表型,，提供額外的信息。
胸腺細(xì)胞或脾細(xì)胞表面熒光抗體染色,，具體CD62L,，CD44，CD196,，或適當(dāng)?shù)拿庖咔虻鞍淄蛯φ?。?xì)胞被固定和透BD Pharmingen公司轉(zhuǎn)錄因子緩沖器組，然后在細(xì)胞內(nèi)染色RORγt的,，F(xiàn)oxp3的,，IL-17和IFN-γ,。中藥標(biāo)準(zhǔn)對照品網(wǎng)整理提供