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簡(jiǎn)化細(xì)胞凋亡研究的工具
閱讀：489 發(fā)布時(shí)間：2021-4-13有許多凋亡觸發(fā)器,，其中包括某些細(xì)胞因子，蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)相互作用和化學(xué)品,。一旦開(kāi)始凋亡,，線粒體膜電位變化，可以測(cè)量通過(guò)流式細(xì)胞儀使用BD：MitoScreen（JC-1）流式細(xì)胞儀檢測(cè)試劑盒,。
線粒體膜電位導(dǎo)致線粒體膜通透性增加,，并釋放出可溶性蛋白，如細(xì)胞色素C和親半胱天冬酶的增加,。
半胱天冬蛋白酶激活后,，天門(mén)冬氨酸殘基的裂解在凋亡過(guò)程中的早期是一系列?；钴S的半胱天冬酶可以切割許多蛋白質(zhì),，包括聚ADP核糖聚合酶（PARP）和半胱天冬。
DNA的片段化是在細(xì)胞凋亡導(dǎo)致的核酸內(nèi)切酶的活化在細(xì)胞凋亡過(guò)程中的最后階段,。有一些已建立的方法,，包括分離和分離的DNA的片段通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳和末端標(biāo)記的DNA的片段化的研究。
BDAPO的BrdU試劑盒采用結(jié)束標(biāo)簽或末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TDT）缺口末端標(biāo)記法（TUNEL法）支持研究的DNA的片段,。在該試驗(yàn)中,，末端轉(zhuǎn)移酶催化依賴(lài)模板的bromolated的脫氧尿苷三磷酸（溴的dUTP），羥基（OH）的3'-末端的雙鏈和單鏈DNA,。的Br-dUTP的成立后,，這些終端站點(diǎn)使用流式細(xì)胞儀，雙和單鏈DNA識(shí)別染色細(xì)胞抗BrdU標(biāo)記,。與此相反,，的BrdU增殖測(cè)定結(jié)合到新合成的DNA中的BrdU，DNA鏈斷裂的網(wǎng)站,。
用壓倒性數(shù)目的可用技術(shù)和產(chǎn)品,，選擇最合適的方法是非常困難的。為了幫助使這個(gè)選擇更容易,，概述總結(jié)市售的檢測(cè)從生物學(xué)的角度來(lái)看,。
劈開(kāi)caspases的測(cè)量和PARP半胱天冬是細(xì)胞凋亡的重要發(fā)起者,。最早，最一貫觀察細(xì)胞凋亡的特點(diǎn)之一是一系列的胞漿蛋白酶,，叫做半胱天冬酶的激活,。當(dāng)被激活細(xì)胞凋亡，半胱氨酸蛋白酶切割多蛋白底物一起,，導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的喪失,，并最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。特別是,，-8,，-9，半胱天冬酶-3已經(jīng)牽連在細(xì)胞凋亡：caspase-9的線粒體途徑,，Caspase-8在Fas/CD95途徑,，通過(guò)多種途徑活化的caspase-3的下游。
其他技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡各種試劑進(jìn)行測(cè)量半胱天冬酶,，特別是caspase-3的,。他們包括專(zhuān)門(mén)針對(duì)蛋白酶的活性形式的抗體。這些抗體是在各種不同的格式,，并提供可用于成像,，流式細(xì)胞術(shù)，ELISA,，Western印跡,。一系列個(gè)別熒光肽底物和抑制劑對(duì)caspase活性檢測(cè)工具包，隨時(shí)可以使用檢測(cè)板,。是這樣設(shè)計(jì)的水解作用而釋放的熒光基團(tuán)或發(fā)色基團(tuán)的基團(tuán)的活性的人或小鼠的半胱天冬酶的結(jié)果,，合成的四肽底物的基礎(chǔ)上使用。連同半胱天冬酶抑制劑和活性半胱天冬酶酶的半胱天冬酶的活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案的靈活性,。