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ELISA檢測，按照試劑說明書要求,，每次試驗,、每塊扳上都要設(shè)置以下3項對照：

　　1.空白對照：僅用稀釋液代替檢測樣本、用以觀測zui終反應(yīng)的顯色“本底”,、并用于酶標(biāo)儀消除,、扣除“本底”， 或者,，在計算陰性對照均值(NCx),、陽性對照均值(PCx)、樣本讀數(shù)的S/C.O.值時減去空白對照的本底吸光值,。 空白孔具體如何讀取讀數(shù),，則依照說明書操作。 如：以空氣讀空白(不放板架和板條),，在450nm(單波長),、或450nm和620—700mn(底物是TMB)參考波長進(jìn)行讀數(shù)。

　　2.陰性對照(品)：

　　(1)陰性對照(品)的概念與要求：所謂陰性對照(品),，應(yīng)當(dāng)是本項檢測試驗中采用與待撿物(樣品、人的血清等)具有同源性和同質(zhì)性,，又不含有待檢物質(zhì),，并能客觀比較和鑒別處理因素(血清免疫學(xué)試驗中有特異性抗原與抗體反應(yīng))之間的差異。因此,，用動物血清或其制品(如牛血清白蛋白等)代替陰性人血清作為對照品,，從理論和實踐上都是不可取的，弊端甚多,，無須細(xì)述,。 陰性對照讀數(shù),，并非是“越低越好”。NCx值接近0.00X水平,，這是假象!試想一下,，真正采用“陰性人血清”的陰性對照品，NCx值會如此之低嗎? 一個題外插曲：表明ELISA試劑內(nèi)在質(zhì)量的一個重要統(tǒng)計標(biāo)志,，就是要看：陰性樣本的的上限不應(yīng)當(dāng)大于,、必須小于C.O.I.=1.00;反之，陽性樣本的的下限不可小于,、應(yīng)當(dāng)大于C.O.I.=1.00! 這里如此細(xì)說NCx是因為NCx值在Cut off值計算中是相當(dāng)舉足輕重的,。

　　(2)陰性對照(品)分為兩類

　　一是代表受檢人血清中并不含有、或方法學(xué)靈敏度未能檢出的待檢物的基準(zhǔn)水平,，并且是結(jié)果判斷值(Cut off)計算式中決定“是”(陽性),、或“否”(陰性)的可變值。陰性對照值高,，導(dǎo)致假陰性;反之,，導(dǎo)致假陽性。 二是陰性對照設(shè)置,，在方法學(xué)上要求加入指示性定量標(biāo)準(zhǔn)品,，或者，選取代表平均水平的正常人血清用作陰性對照,。此類Cut off 值計算時,，多數(shù)均包括陰性和陽性對照值2個可變值。

　　3.陽性對照(品)：

　　(1)陽性對照(品)的概念與要求：同陰性對照(品),，只是采用“精選”的含有待檢物質(zhì)的人血清制備而成,。所謂“精選”，就是把收集的陽性人血清經(jīng)過數(shù)種試驗進(jìn)行“篩試”,、把含有“干擾性物質(zhì)”的血清剔除,、不用，以避免出現(xiàn)“假陽性”干擾試驗結(jié)果,。

　　(2)陽性對照(品)設(shè)置,，也可區(qū)分為兩種類型與用途：

　　一是陽性對照主要用于評價該項試驗結(jié)果是否有效和試驗結(jié)果的穩(wěn)定性與可比性。而所設(shè)的陽性對照的測量值不列入Cut off值計算,、但是不可不做,。 二是陽性對照的設(shè)置，不僅用于評價試驗結(jié)果是否有效和試驗結(jié)果的穩(wěn)定性與可比性,，而且計入Cut off的計算,。此時的Cut off值的含義是代表該標(biāo)志物在健康(正常)人群中正常值范圍的上限。待檢樣本檢測值超過該上限(Cut off)時表示有診斷意義。

　　陽性與陰性灰?guī)?/strong>

　　此處所指陽性與陰性灰?guī)?,，既是試劑本身的質(zhì)量評價指標(biāo),，也是判斷待檢樣本中是否有需要重復(fù)復(fù)檢的可疑樣本范圍(Sample Retest Range)，及各批/次試驗時可疑樣本占有率,。

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