PCR實驗室裝修介紹

1,、PCR實驗室平面布局
PCR擴增檢驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區(qū)域：試劑貯存和準備區(qū),、標(biāo)本制備區(qū)、擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū),、擴增產(chǎn)物分析區(qū),。為避免交叉污染，進入各個工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向進行,，即只能從試劑貯存和準備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū),。
2、實驗室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計及壓力控制
PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求,，但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性,，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時,，要嚴格控制送,、排風(fēng)的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。
2.1PCR試劑貯存和準備區(qū)
該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備,、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備,。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū),，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑,。
對與氣流壓力的控制，本區(qū)并沒有嚴格的要求,。
2.2PCR標(biāo)本制備區(qū)
該區(qū)域主要進行的操作為樣本的保存,、核酸(RNA、DNA)提取,、貯存及其加入至擴增反應(yīng)管和測定DNA的合成,。
本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染,。另外,，由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動,。
2.3擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)
該區(qū)域主要進行的操作為DNA擴增,。此外，已制備的DNA模板 (來自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行,。
本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓,，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染,，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動,。個別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺內(nèi)進行。
2.4擴增產(chǎn)物分析區(qū)
該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定,。
本區(qū)是zui主要的擴增產(chǎn)物污染來源,，因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域,。
3,、PCR實驗室裝修，污染的預(yù)防與控制
PCR實驗室設(shè)計的核心問題是如何避免污染,。在實際工作中,，常見的有以下幾種污染類型：擴增產(chǎn)物的污染；天然基因組DNA的污染,；試劑的污染以及標(biāo)本間的污染,。由于一旦發(fā)生污染,，實驗就必須停止,，直到找到污染源為止，而且實驗結(jié)果必須作廢,，需重新進行實驗,。所以發(fā)生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣,，浪費人力物力。因此要避免污染,，首先應(yīng)是預(yù)防,，而不是排除。
3.1工作區(qū)域的嚴格劃分
（1）各個實驗區(qū)域設(shè)置合理,；
（2）各個實驗區(qū)域要有明顯的標(biāo)記（如醒目的門牌或不同的地面顏色等）,，以避免各個不同實驗區(qū)域設(shè)備物品、試劑等發(fā)生混淆,。
3.2合理的系統(tǒng)設(shè)置
（1）合理的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)置,，盡量采用全送全排的空調(diào)系統(tǒng)；
（2）嚴格的氣流壓力控制,，保證不同的實驗區(qū)內(nèi)不同的壓力要求,。
3.3 規(guī)范的操作
（1）擴增檢驗實驗室的技術(shù)人員必須進行上崗培訓(xùn)，經(jīng)培訓(xùn)合格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作,；
（2）在實驗操作過程中,，操作者必須戴手套，并經(jīng)常更換,。此外,，操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施；
（3）清潔工作及時,、正確,。實驗工作結(jié)束后，必須立即對本區(qū)進行清潔,。除常規(guī)的消毒液體對表面進行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外,，對一些實驗設(shè)備還應(yīng)進行高壓消毒處理。
3.4嚴格的管理
（1）嚴格控制進出實驗室的人員,。與實驗無關(guān)的人員不得隨意進出實驗室,，有條件的情況下要設(shè)置獨立的通道和進出整個實驗區(qū)的門；
（2）盡量減少在實驗區(qū)內(nèi)不必要的走動以減少交叉污染的可能性,。
（3）擴增產(chǎn)物分析區(qū)是zui主要的擴增產(chǎn)物污染來源,，廢液不能在實驗室中傾倒，必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉,，用過的吸頭等一次性材料也應(yīng)經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理,，如焚燒等；
（4）擴增產(chǎn)物分析區(qū)可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì),，應(yīng)特別注意實驗人員的安全防護,。
3.5完備的實驗室配套設(shè)施
完備的實驗室配套設(shè)施是保證實驗工作的必要條件，應(yīng)根據(jù)各個實驗室實驗內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器，如超凈工作臺,、離心機,、加樣器等。