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【導(dǎo)讀】 面對(duì)眾多的污染源,，比如樣本交叉污染、試劑儀器交叉污染,、克隆質(zhì)粒污染,、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染、還有極容易忽視的氣溶膠污染,，氣溶膠是由固體或液體小質(zhì)點(diǎn)分散并懸浮在氣體介質(zhì)中形成的膠體分散體系,，在空氣與液體面摩擦?xí)r，比如在操作時(shí)比較劇烈地?fù)u動(dòng)反應(yīng)管,，開(kāi)蓋時(shí),、吸樣時(shí)及污染進(jìn)樣槍的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠而污染。

你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果受到污染的影響了嗎,？

生物實(shí)驗(yàn),，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)都是微觀的，基于細(xì)胞,，分子,，蛋白水平，而這些微觀樣本對(duì)外界環(huán)境的影響敏感,，比如溫度,、ph值、酶解、損傷等,，在我們盡力呵護(hù)樣本的生存環(huán)境的同時(shí),，污染也是需要注意的頭等大事，要堅(jiān)決避免環(huán)境中的“雜質(zhì)”的亂入,，包括樣本污染,，試劑儀器交叉污染、產(chǎn)物氣溶膠污染等對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,。“易查不易察”,，污染來(lái)的悄無(wú)聲息，防不勝防,，假陽(yáng)性結(jié)果讓無(wú)數(shù)生物學(xué)子抓狂和崩潰,。

祿米今天就來(lái)扒一扒生物實(shí)驗(yàn)室污染之PCR實(shí)驗(yàn)污染你不知道的事

在眾多的生物實(shí)驗(yàn)室，分子生物學(xué)檢測(cè)方法如PCR因其高靈敏度,、快速,、操作方便等優(yōu)勢(shì)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用，不過(guò)正是由于它靈敏度*,，極微量的污染源都有可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)性,，所以對(duì)環(huán)境污染的控制也極為嚴(yán)格。面對(duì)眾多的污染源,，比如樣本交叉污染,、試劑儀器交叉污染、克隆質(zhì)粒污染,、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染,、還有極容易忽視的氣溶膠污染，氣溶膠是由固體或液體小質(zhì)點(diǎn)分散并懸浮在氣體介質(zhì)中形成的膠體分散體系,，在空氣與液體面摩擦?xí)r,，比如在操作時(shí)比較劇烈地?fù)u動(dòng)反應(yīng)管，開(kāi)蓋時(shí),、吸樣時(shí)及污染進(jìn)樣槍的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠而污染,。據(jù)計(jì)算一個(gè)氣溶膠顆粒可含48000拷貝,，因而由其造成的污染是一個(gè)非常重要而被忽視的污染源,。

雖然這些污染對(duì)PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響已經(jīng)受到了廣泛重視，多數(shù)實(shí)驗(yàn)室對(duì)污染控制都采取了各種辦法,，比如定期大掃除清理、劃分操作區(qū)域,、試劑分裝,、操作謹(jǐn)慎、重復(fù)實(shí)驗(yàn)、多角度驗(yàn)證結(jié)果,。但是微量的核酸片段就能被擴(kuò)增,，所以對(duì)污染物的控制不僅僅是做到這些就能夠杜絕和避免的，關(guān)鍵是需要從源頭控制,。目前多數(shù)生物試驗(yàn)室,，分子實(shí)驗(yàn)每天都在大規(guī)模進(jìn)行，污染源已經(jīng)無(wú)處不在,，特異性的,，非特異性的，同源的,，非同源的,，廣泛分布在樣本容器、實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面,，試劑溶液中,、儀器表面內(nèi)管附著等等，你以為普通的清理就能解決這些污染源嗎,？必須是不行的,，實(shí)驗(yàn)室大拿們都為了清除這些污染源研究出好多種方法，整理跟大家共享,。

  常見(jiàn)的防止污染的方法,，推薦給大家

合理的實(shí)驗(yàn)室分區(qū)

實(shí)驗(yàn)室內(nèi)各工作區(qū)的實(shí)驗(yàn)用品，包括移液器等應(yīng),。如有可能,，應(yīng)在裝有紫外燈的層流式工作臺(tái)（如生物安全柜、超凈工作臺(tái)）內(nèi),，吸加PCR試劑,，工作臺(tái)內(nèi)應(yīng)放置PCR專業(yè)用的微量離心機(jī)、一次性手套,、各量程的移液器和其他必須物品,。

正確的實(shí)驗(yàn)操作

1. 吸加PCR試劑和模板的操作應(yīng)嚴(yán)格按要求進(jìn)行，吸樣要慢,，盡量一次性完成,，忌多次抽吸，以免交叉污染或產(chǎn)生氣溶膠污染,。

2. 實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中應(yīng)勤換手套,，在進(jìn)出不同區(qū)域或進(jìn)行模板操作后，都應(yīng)及時(shí)更換手套,。

3. 裝有PCR試劑的微量離心管在打開(kāi)之前應(yīng)先做瞬時(shí)離心（約10s）,，將管壁及管蓋上的液體甩至管底部,，從而減少污染手套或加樣器的機(jī)會(huì)。開(kāi)管動(dòng)作要輕,，以防管內(nèi)液體濺出或形成氣溶膠,，造成污染。

4. 在同時(shí)進(jìn)行多個(gè)PCR反應(yīng)時(shí),，應(yīng)制備主反應(yīng)混合液,，再分裝至PCR反應(yīng)管，zui后添加樣品核酸模板,，以減少單個(gè)添加操作繁瑣造成的污染,。

實(shí)驗(yàn)器具和試劑

1. 實(shí)驗(yàn)室自己配置的試劑，如去離子水,、緩沖液等,，在使用之前均應(yīng)高壓滅菌或過(guò)濾除菌。

2. 分裝PCR試劑：所有的PCR試劑都應(yīng)小量分裝,，以減少重復(fù)取樣次數(shù),，并置于-20℃保存，適當(dāng)時(shí),，做到專人,。另外，PCR試劑,、PCR反應(yīng)液應(yīng)與樣品及PCR產(chǎn)物分開(kāi)保存,，不應(yīng)放于同一冰盒或冰箱。

3. 所有吸頭,、反應(yīng)管等應(yīng)一次性使用,，使用之前，都應(yīng)經(jīng)過(guò)高壓處理,。若條件允許,，使用帶濾器的槍頭。各工作區(qū)內(nèi)的移液器要有標(biāo)識(shí),，應(yīng)固定使用用途,，不能交叉使用。

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方面應(yīng)遵循實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制的相關(guān)規(guī)定,，實(shí)驗(yàn)中至少應(yīng)：

1. 設(shè)置目標(biāo)DNA陽(yáng)性對(duì)照反應(yīng),。對(duì)靶序列所作的適當(dāng)?shù)南♂尮ぷ鲬?yīng)于實(shí)驗(yàn)前在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)別的位置進(jìn)行，這樣可防止將靶DNA的濃溶液帶到實(shí)驗(yàn)室中專門(mén)進(jìn)行PCR的位置,。

2. 設(shè)置PCR試劑陰性對(duì)照和目標(biāo)DNA陰性對(duì)照反應(yīng),。