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SNU-182 人肝癌細胞描述

該細胞系來自 24 歲亞洲男性。細胞包含單個細胞核,，Southernblot 可檢測到乙型肝炎病毒(HBV)DNA,，不表達乙肝病毒基因組 RNA，需在 2 級生物安全防護操作,。

細胞特性

1） 來源：人 肝癌

2） 形態(tài)：上皮細胞樣,，貼壁生長

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸,，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；

（2）存活細胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長,，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟,。

（3）收到細胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,，請及時拍照與我們聯(lián)系,。

細胞用途：僅供科研使用。

SNU-182 人肝癌細胞接收后的處理：

1） 收到細胞后,，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們,。

2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行,，能準確判斷細胞的傳代密度,。看細胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下,，同時給剛收到的細胞拍照,，（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3） 觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,。

4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象,，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。

5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）。

6）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。  收到細胞后di一次傳代建議1：2傳代 。

SNU-182 人肝癌細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1．準備1640（推薦iCell-0002）培養(yǎng)基,優(yōu)質(zhì)胎牛血清FBS 10%,；GlutaMAX™-I（GIBCO,35050061) 2mM,；Sodium Pyruvate(GIBCO 11360070), 1mM。P/S 1%

2. 培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3. 凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

注：di一次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定,。

對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞,，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3） 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。

下面T25瓶為例,；

1,，細胞凍存時，取上清,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。

2，4min ,，1000rpm 離心去掉上清,。加基礎(chǔ)培養(yǎng)基和血清重懸細胞，再加入DMSO,，輕輕混勻,，DMSO終濃度為8%，細胞密度1-2xE6/ml,，每支凍存管凍存1ml細胞懸液,，注意凍存管做好標識。

3,，將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

鏡像綺點（上海）細胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)：

一、原代細胞服務(wù)
       各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源,；
       多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源,；
       原代細胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit,、培養(yǎng)基添加劑等,；
       原代細胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)和整體實驗外包服務(wù)；

二,、細胞株/系服務(wù)
       細胞株/系培養(yǎng),、增殖,、凍存和相關(guān)說明書；
       細胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導(dǎo),；
       細胞系培養(yǎng)基、添加劑,、血清及相關(guān)生長因子,、試劑等；

三,、iPS細胞
       iPS細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層在）,；
       iPS細胞增殖及冷凍保存；
       iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實習(xí),；
       新藥及實驗儀器上市前評估,；

四、技術(shù)外包服務(wù)：各類細胞生物學(xué)實驗,、分子生物學(xué)實驗,、顯微鏡拍照服務(wù)等

五、其他：根據(jù)客戶需要定制服務(wù)等