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U266 人骨髓瘤細胞介紹

該細胞來源于多發(fā)性骨髓瘤男性患者,，表達IgG,，分泌IL-6,。

細胞特性

1） 來源：人骨髓

2） 形態(tài)：淋巴母細胞樣,懸浮生長

3） 含量：>1x106

4） 污染：支原體、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸,，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇,；

（2）存活細胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,，再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟,。

（3）收到細胞后請拍照,，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系,。

細胞用途：僅供科研使用,。

細胞接收后的處理：

1） 收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們,。

2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時,，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳代密度,?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照,，（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù),。

3） 觀察好細胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象,，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）。

5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）,。

6）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后di一次傳代建議1：2傳代 ,。

U266 人骨髓瘤細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備1640(推薦 iCell-128-0002 含NAHCO3  1.5g/L）)培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，15%,；雙抗,，1%。(注意：該細胞培養(yǎng)PH值不超過7.0）,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+20%FBS+8%DMSO (細胞培養(yǎng)級),。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

注：di一次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定,。

對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3） 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。

下面T25瓶為例,；

1,，細胞凍存時,，取上清,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2,，4min ,，1000rpm 離心去掉上清。加基礎(chǔ)培養(yǎng)基和血清重懸細胞,，再加入DMSO,，輕輕混勻，DMSO終濃度為8%,，細胞密度1-2xE6/ml,，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識,。

3,，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。