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2V6.11 人胚腎細胞/STR鑒定細胞介紹
這株細胞是2001年從人胚腎細胞株293衍化而來,。293細胞用攜帶Zeocin-抗性標記的質粒pVgRXR轉染得到293pVgRXR細胞。隨后,用包含編碼E424K的Ad5E4ORF6基因的質粒pEKORF6轉染,。pEKORF6從包含潮霉素抗性基因的質粒pIndHydro衍生而來,。載體包含SV40病毒序列。
2V6.11細胞株初從含潮霉素的培養(yǎng)液中用克隆環(huán)分離單克隆得到,。2V6.11細胞誘導表達的人腺病毒E434KDa蛋白可通過免疫印跡法檢測,。這株細胞可以用作研究腺病毒E4癌基因的工具。
細胞特性
1） 來源：人胚胎腎臟
2） 形態(tài)：上皮細胞樣,，貼壁生長
3） 含量：>1x106 個/mL
4） 污染：支原體,、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存
可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式
（1）干冰運輸,，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；
（2）存活細胞,，收到后應繼續(xù)生長,，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟,。
（3）收到細胞后請拍照，3天內如果發(fā)現污染,，請及時拍照與我們聯系,。
細胞用途：僅供科研使用。
2V6.11 人胚腎細胞/STR鑒定接收后的處理：
1） 收到細胞后,，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,，若發(fā)現培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,，請拍照后及時聯系我們,。
2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行,，能準確判斷細胞的傳代密度,?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照,，（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據,。
3） 觀察好細胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。
4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現象,，如發(fā)現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,，可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中（或新的培養(yǎng)瓶中）,。
5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）,。
6）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。 收到細胞后di一次傳代建議1：2傳代 ,。
細胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備MEM（推薦iCell-0012）培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清,，10%,；雙抗 1%
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3） 凍存液：90%FBS，10%DMSO,，現用現配,。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入250px皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度,。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按1：2到1:5比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。
下面T25瓶為類,；
1，細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗一遍后加入1mlyi酶，細胞變圓脫落后,，加入1ml*培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數板計數。
2,，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,，根據細胞數量加入血清和DMSO,，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%,，細胞密度1-2xE6/ml,，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識,。
3,，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
鏡像綺點（上海）細胞技術有限公司主要產品和技術服務：
一、原代細胞服務
各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源,；
多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源,；
原代細胞分離和培養(yǎng)相關試劑、kit,、培養(yǎng)基添加劑等,；
原代細胞相關技術服務和整體實驗外包服務；
二,、細胞株/系服務
細胞株/系培養(yǎng),、增殖、凍存和相關說明書,；
細胞系培養(yǎng)過程的技術指導,；
細胞系培養(yǎng)基、添加劑,、血清及相關生長因子,、試劑等；
三,、iPS細胞
iPS細胞基礎培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層在）,；
iPS細胞增殖及冷凍保存；
iPS基礎培養(yǎng)技術實習,；
新藥及實驗儀器上市前評估,；
四、技術外包服務：各類細胞生物學實驗,、分子生物學實驗,、顯微鏡拍照服務等
五、其他：根據客戶需要定制服務等
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