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1) 來源:小鼠胃癌
2) 形態(tài):上皮細胞樣,貼壁生長
3) 含量:>1x106 個/mL
4) 污染:支原體,、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性
5) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存
可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式:
(1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇,;
(2)存活細胞,,收到后應繼續(xù)生長,傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,,再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
(3)收到細胞后請拍照,,3天內如果發(fā)現污染,,請及時拍照與我們聯系。
細胞用途:僅供科研使用,。
MFC 小鼠前胃癌細胞/鏡像綺點(iCell)接受后的處理:
1) 收到細胞后,,請檢查是否漏液,如果漏液,,請拍照片發(fā)給我們,。
2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,,添加6ml新的*培養(yǎng)基,。
4) 如果細胞長滿(90%以上)請及時進行細胞傳代。
5) 接到細胞次日,,請檢查細胞是否污染,,若發(fā)現污染或疑似污染,請及時與我們取得聯系,。
細胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備RPMI-1640培養(yǎng)基,;優(yōu)質胎牛血清,10%,;雙抗,,1%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37攝氏度,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,,10%DMSO,,現用現配。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過夜),。第二天換液并檢查細胞密度,。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注:*次傳代推薦傳代比例為1:2,,以后傳代比例可根據客戶需要自己決定,。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存,。
下面T25瓶為類,;
1,細胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后,,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,,加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計數板計數。
2,,4min 1000rpm 離心去掉上清,。加1ml血清重懸細胞,根據細胞數量加入血清和DMSO,,輕輕混勻,,DMSO終濃度為10%,細胞密度不低于1x106/ml,,每支凍存管凍存1ml細胞懸液,,注意凍存管做好標識。
3,,將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
鏡像綺點(上海)細胞技術有限公司主要產品和服務介紹:
一、原代細胞服務:
各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源
多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源
原代細胞分離和培養(yǎng)相關試劑,、kit,、培養(yǎng)基添加劑等
原代細胞相關技術服務及整體實驗外包服務
二,、細胞系服務:
細胞株/系培養(yǎng)、增殖,、凍存和相關說明書
細胞系培養(yǎng)過程的技術指導
細胞系培養(yǎng)基,、添加劑、血清及相關生長因子,、試劑等
三,、iPS細胞服務:
iPS細胞基礎培養(yǎng)(有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層)
iPS細胞增殖及冷凍保存
iPS基礎培養(yǎng)技術實習
新藥及實驗儀器上市前評估
四、其他技術外包服務,、客戶定制服務等
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