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NRK-52E 大鼠腎細胞/鏡像綺點（iCell）特性

1） 來源：大鼠,，正常腎

2） 形態(tài)：上皮細胞樣,，貼壁生長

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：

（1）干冰運輸,，收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞,，收到后應繼續(xù)生長,，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟,。

（3）收到細胞后請拍照,，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系,。

NRK-52E 大鼠腎細胞/鏡像綺點（iCell）接受后的處理：

1） 收到細胞后,，請檢查是否漏液，如果漏液,，請拍照片發(fā)給我們。

2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h,。

3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的*培養(yǎng)基,。

4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代,。

5） 接到細胞次日，請檢查細胞是否污染,，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

細胞用途：僅供科研使用,。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程,，供參考

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備DMEM培養(yǎng)基；小牛血清,，10%,；添加10ng/ml EGF；雙抗,，1%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37℃,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化,。

3. 輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 移入到事先準備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),。

注：*次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定,。

3） 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,，先要消化處理并進行細胞計數(shù),。消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進行，后的重懸液使用血清,。懸浮細胞直接計數(shù)后離心,，用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存,。

下面T25瓶為例,；

1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,，細胞變圓脫落后,，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。

2．1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識,。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存,。

3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點（上海）細胞技術有限公司主要產(chǎn)品和服務介紹：

        一,、原代細胞服務：
               各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源
               多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源
               原代細胞分離和培養(yǎng)相關試劑,、kit,、培養(yǎng)基添加劑等
               原代細胞相關技術服務及整體實驗外包服務

        二,、細胞系服務：
               細胞株/系培養(yǎng)、增殖,、凍存和相關說明書
               細胞系培養(yǎng)過程的技術指導
               細胞系培養(yǎng)基,、添加劑、血清及相關生長因子,、試劑等

        三,、iPS細胞服務：
               iPS細胞基礎培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層）
               iPS細胞增殖及冷凍保存
               iPS基礎培養(yǎng)技術實習
               新藥及實驗儀器上市前評估

        四、其他技術外包服務,、客戶定制服務等

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