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TM4 正常小鼠睪丸Sertoli細(xì)胞特性

1） 來源：小鼠睪丸

2） 形態(tài)：上皮維細(xì)胞,，貼壁生長(zhǎng)

3） 含量：>1x106 個(gè)/mL

4） 污染：支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：

（1）干冰運(yùn)輸,，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇,；

（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng),，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。

（3）收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照,，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系,。

TM4 正常小鼠睪丸Sertoli細(xì)胞用途：僅供科研使用,。

細(xì)胞接收后的處理：

1） 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液,，如果漏液,，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。

2） 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),，酒精消毒瓶壁并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h,。

3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新*培養(yǎng)基,。

4）如果細(xì)胞長(zhǎng)滿90%請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代

5） 接到細(xì)胞次日,，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系,。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備DMEM/F12培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)北美胎牛血清,，2.5%,；馬血清，5%,；雙抗,，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%FBS,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量*培養(yǎng)基終止消化,。

3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液,，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1:5比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

注：*次傳代推薦傳代比例為1:2,，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。

下面T25瓶為類；

1,，細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml*培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。

2，4min 1000rpm 離心去掉上清,。加1ml血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%,，細(xì)胞密度1-2xE6/ml,，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí),。

3,，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱,，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和服務(wù)介紹：

        一,、原代細(xì)胞服務(wù)：
               各類模式哺乳動(dòng)物的多種原代細(xì)胞資源
               多種人源性正常及腫瘤原代細(xì)胞資源
               原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑,、kit、培養(yǎng)基添加劑等
               原代細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)及整體實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)

        二,、細(xì)胞系服務(wù)：
               細(xì)胞株/系培養(yǎng),、增殖、凍存和相關(guān)說明書
               細(xì)胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導(dǎo)
               細(xì)胞系培養(yǎng)基,、添加劑,、血清及相關(guān)生長(zhǎng)因子、試劑等

        三,、iPS細(xì)胞服務(wù)：
               iPS細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層）
               iPS細(xì)胞增殖及冷凍保存
               iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實(shí)習(xí)
               新藥及實(shí)驗(yàn)儀器上市前評(píng)估

        四,、其他技術(shù)外包服務(wù)、客戶定制服務(wù)等

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