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DT40 雞淋巴瘤細(xì)胞/鏡像綺點(diǎn)（iCell）介紹

DT40是來自Hyline SC雞法氏囊淋巴細(xì)胞株經(jīng)鳥類白血病病毒誘導(dǎo)建株的,。原始淋巴瘤用羅氏相關(guān)病毒1(RAV-1)感染出生１天的小雞得到,。法氏囊中生成的腫瘤制成細(xì)胞懸液后通過靜脈注射輸入同基因型的受體小雞。經(jīng)過一次體內(nèi)移植后,，建立了DT40細(xì)胞株,。 這株細(xì)胞包含的前病毒基因整合在c-myc原癌基因的上游，表達(dá)的c-myc RNA水平較高,。它缺少一個(gè)正常c-myc基因,，但含有兩個(gè)拷貝ALV去調(diào)控的myc基因。這株細(xì)胞保留了重排免疫球蛋白輕鏈基因(IgL)的能力,。 在IgL位點(diǎn),，DT40包含一個(gè)重排和一個(gè)胚系同源基因。c-rel基因和v-rel癌基因在DT40細(xì)胞株中都能誘導(dǎo)組織相容性(MHC)II類抗原表達(dá),。v-rel 誘導(dǎo)的MHCII表達(dá)比c-rel誘導(dǎo)快,，且其有效性在數(shù)周后達(dá)到c-rel的50倍,。這株細(xì)胞呈淋巴母細(xì)胞表型。傳染性檢測表明DT40釋放低水平的傳染性RAV-1,。這株細(xì)胞可以用于穩(wěn)轉(zhuǎn)研究,。

細(xì)胞特性

1） 來源：法氏囊，淋巴瘤

2） 形態(tài)：淋巴母細(xì)胞,，懸浮

3） 含量：>1x106 個(gè)/mL

4） 污染：支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：

（1）干冰運(yùn)輸,，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇,；

（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長,，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。

（3）收到細(xì)胞后請拍照,，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時(shí)拍照與我們聯(lián)系,。

細(xì)胞用途：僅供科研使用,。

DT40 雞淋巴瘤細(xì)胞/鏡像綺點(diǎn)（iCell）接收后的處理：

1） 收到細(xì)胞后，請檢查是否漏液,，如果漏液,，請拍照片發(fā)給我們。

2） 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài),，酒精消毒瓶壁并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h,。

3） 將T25瓶中的培養(yǎng)基離心后，去上清,，添加6ml*培養(yǎng)基,，加入新的T25瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

4) 如果細(xì)胞長滿80%請及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代.

5） 接到細(xì)胞次日,，請檢查細(xì)胞是否污染,，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系,。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基,；北美胎牛血清，10%,；雞血清,，5%；b-巰基乙醇,，0.05mM,；雙抗,，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

1. 收到細(xì)胞后*傳代推薦將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，建議凍存一支備用,，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2到1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。

下面T25瓶為類；

1,，細(xì)胞凍存時(shí),，取上清，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。

2,，4min ，1000rpm 離心去掉上清,。加1ml血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻,，DMSO終濃度為10%,，細(xì)胞密度1-2xE6/ml,，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識,。

3,，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱,，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和服務(wù)介紹：

        一,、原代細(xì)胞服務(wù)：
               各類模式哺乳動(dòng)物的多種原代細(xì)胞資源
               多種人源性正常及腫瘤原代細(xì)胞資源
               原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑,、kit、培養(yǎng)基添加劑等
               原代細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)及整體實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)

        二,、細(xì)胞系服務(wù)：
               細(xì)胞株/系培養(yǎng),、增殖、凍存和相關(guān)說明書
               細(xì)胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導(dǎo)
               細(xì)胞系培養(yǎng)基,、添加劑,、血清及相關(guān)生長因子、試劑等

        三,、iPS細(xì)胞服務(wù)：
               iPS細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層）
               iPS細(xì)胞增殖及冷凍保存
               iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實(shí)習(xí)
               新藥及實(shí)驗(yàn)儀器上市前評估

        四,、其他技術(shù)外包服務(wù)、客戶定制服務(wù)等

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