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NCTC1469 小鼠正常肝細胞/鏡像綺點（iCell）介紹
1952年建系,，源于正常C3H/An小鼠的肝臟組織，表達H-2K抗原,鼠痘病毒陰性,。

細胞特性
1）來源：小鼠的肝組織
2）形態(tài)：上皮細胞樣
3）含量：>1x10⁶ 個/mL
4）污染：支原體,、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

細胞接受后的處理：
1）收到細胞后，請檢查是否漏液,，如果漏液,，請拍照片發(fā)給我們。
2）請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h,。
3）棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基,。
4）如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代,，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5）接到細胞次日,，請檢查細胞是否污染,，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系,。

細胞用途：僅供科研使用,。
                       

NCTC1469 小鼠正常肝細胞/鏡像綺點（iCell）培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備DMEM培養(yǎng)基(DMEM,，GIBCO,，貨號11995-065)；馬血清,，10%,；雙抗1%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37℃,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存,。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍,，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化,。

3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4.移入到事先準備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。

下面T25瓶為例,；

      1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,，細胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。

      2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,，加DMSO至終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,，注意凍存管做好標識,。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。

      3．將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

鏡像綺點（上海）細胞技術有限公司主要產(chǎn)品和服務介紹：

        一,、原代細胞服務：
               各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源
               多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源
               原代細胞分離和培養(yǎng)相關試劑,、kit、培養(yǎng)基添加劑等
               原代細胞相關技術服務及整體實驗外包服務

        二,、細胞系服務：
               細胞株/系培養(yǎng),、增殖、凍存和相關說明書
               細胞系培養(yǎng)過程的技術指導
               細胞系培養(yǎng)基,、添加劑,、血清及相關生長因子、試劑等

        三,、iPS細胞服務：
               iPS細胞基礎培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層）
               iPS細胞增殖及冷凍保存
               iPS基礎培養(yǎng)技術實習
               新藥及實驗儀器上市前評估

        四,、其他技術外包服務、客戶定制服務等

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