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MCF-7 人乳腺癌細(xì)胞/STR鑒定/鏡像綺點(diǎn)（iCell）介紹

該細(xì)胞是從一名69歲的白人女性乳腺癌患者的胸腔積液中分離建立的。該細(xì)胞保留了多個(gè)分化乳腺上皮的特性,，包括：能通過(guò)胞質(zhì)雌激素受體加工雌二醇并能形成隆突結(jié)構(gòu)（domes）,；該細(xì)胞表達(dá)WNT7B癌基因；TNF-α可以抑制MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng),；抗雌激素處理能調(diào)節(jié)細(xì)胞胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白（IGFBP）的分泌,。

細(xì)胞特性

1） 來(lái)源：腺癌，乳腺,，胸水

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

3） 含量：>1x106 個(gè)/mL

4） 污染：支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：

（1）干冰運(yùn)輸,，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇,；

（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng),，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。

（3）收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照,，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系,。

細(xì)胞用途：僅供科研使用,。

接受后的處理：

1） 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液,，如果漏液,，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。

2） 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h,。

3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的*培養(yǎng)基,。

4） 如果細(xì)胞長(zhǎng)滿（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代,。

5） 接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染,，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系,。

培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基；北美優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,；添加0.01mg/ml 胰島素；雙抗1%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

二． 凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二、細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過(guò)夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

MCF-7 人乳腺癌細(xì)胞/STR鑒定/鏡像綺點(diǎn)（iCell）

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 收到細(xì)胞后*傳代推薦將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，建議凍存一支備用，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2到1:5的比例進(jìn)行,。

細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)：

一,、原代細(xì)胞服務(wù)
       各類模式哺乳動(dòng)物的多種原代細(xì)胞資源,；
       多種人源性正常及腫瘤原代細(xì)胞資源；
       原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑,、kit,、培養(yǎng)基添加劑等；
       原代細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)和整體實(shí)驗(yàn)外包服務(wù),；

二,、細(xì)胞株/系服務(wù)
       細(xì)胞株/系培養(yǎng)、增殖,、凍存和相關(guān)說(shuō)明書,；
       細(xì)胞系培養(yǎng)過(guò)程的技術(shù)指導(dǎo)；
       細(xì)胞系培養(yǎng)基,、添加劑,、血清及相關(guān)生長(zhǎng)因子、試劑等,；

三,、iPS細(xì)胞
       iPS細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無(wú)滋養(yǎng)層在）；
       iPS細(xì)胞增殖及冷凍保存,；
       iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實(shí)習(xí),；
       新藥及實(shí)驗(yàn)儀器上市前評(píng)估；