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NCI-H292人肺癌細(xì)胞(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移) （STR鑒定）

細(xì)胞介紹

此細(xì)胞株源自肺粘膜上皮細(xì)胞癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶,。這個細(xì)胞系用化學(xué)合成培養(yǎng)基分離得到,，并轉(zhuǎn)換成含血清培養(yǎng)液培養(yǎng),。此細(xì)胞在培養(yǎng)時在亞顯微結(jié)構(gòu)上保留了粘膜上皮細(xì)胞的特性，并表現(xiàn)出鱗狀分化的多種標(biāo)記,。

細(xì)胞特性

1） 來源：肺

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：

（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇,；

（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長,，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。

（3）收到細(xì)胞后請拍照,，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系,。

細(xì)胞用途：僅供科研使用,。

細(xì)胞接受后的處理：

1） 收到細(xì)胞后，請檢查是否漏液,，如果漏液,，請拍照片發(fā)給我們。

2） 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài),，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h,。

3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的*培養(yǎng)基,。

4） 如果細(xì)胞長滿（90%以上）請及時進(jìn)行細(xì)胞傳代,。

5） 接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是否污染,，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,；雙抗,，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

注：*次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

下面T25瓶為類,；

1,，細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。

2,，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%,，細(xì)胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識,。

3,，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。