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NCI-H520人肺鱗癌細(xì)胞

細(xì)胞介紹
NCI-H520細(xì)胞系是由A.F. Gazdar和他的同事在1982年從一名肺鱗狀細(xì)胞carcimoma患者的肺標(biāo)本中提取的。
 
細(xì)胞特性
1） 來源：肺癌
2） 形態(tài)：貼壁,，上皮細(xì)胞樣,，多角形，緊密排列
3） 含量：>1x106 個(gè)/mL
4） 污染：支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
 

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式

（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇,；

（2）存活細(xì)胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，再進(jìn)行凍存,。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

（3）收到細(xì)胞后請拍照,，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,，請及時(shí)拍照與我們聯(lián)系,。
 
細(xì)胞用途：僅供科研使用。
 
細(xì)胞接收后的處理：
1） 收到細(xì)胞后,，請檢查是否漏液,，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們,。
2） 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài),，酒精消毒瓶壁并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3） 將T25瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)基離心后,，去上清,，添加6ml*培養(yǎng)基，加入新的T25瓶中繼續(xù)培養(yǎng),。

4) 如果細(xì)胞長滿80%請及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代.

5） 接到細(xì)胞次日,，請檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,，請及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系,。

 
                       
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,；雙抗，1%,。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3） 凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml,。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
注：*次傳代推薦傳代比例為1:2,，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。

下面T25瓶為類,；

1，細(xì)胞凍存時(shí),，取上清,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2,，4min ,，1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,，輕輕混勻,，DMSO終濃度為10%,，細(xì)胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,，注意凍存管做好標(biāo)識(shí),。
3，將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱,，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。