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細(xì)胞描述

該細(xì)胞是從9個月的胎兒胃上皮細(xì)胞中培養(yǎng)分離出來，經(jīng)過SV40病毒轉(zhuǎn)染后,，篩選獲得,。不能在裸鼠中成瘤，是在研究人胃腫瘤過程中一種重要的模式系統(tǒng),。

細(xì)胞特性

1） 來源：胃

2） 形態(tài)：上皮樣,，貼壁細(xì)胞

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：

（1）干冰運(yùn)輸,，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；

（2）存活細(xì)胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長,，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，再進(jìn)行凍存,。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。

（3）收到細(xì)胞后請拍照,，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系,。

細(xì)胞用途：僅供科研使用,。

細(xì)胞接收后的處理：

1） 收到細(xì)胞后，請檢查是否漏液,，如果漏液,，請拍照片發(fā)給我們。

2） 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài),，酒精消毒瓶壁并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h,。

3） 將T25瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)基離心后，去上清,，添加6ml*培養(yǎng)基,，加入新的T25瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

4) 如果細(xì)胞長滿80%請及時進(jìn)行細(xì)胞傳代.

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基,；北美胎牛血清,，10%；2 mM glutamine(谷an酰胺);1 mM pyruvate(丙酮酸鹽); 50 μM 2-mercaptoethanol(巰基乙醇);雙抗,，1%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存細(xì)胞：凍存細(xì)胞時，用FBS重懸細(xì)胞,，然后加入一定量的DMSO,，輕輕混合均勻后移入到凍存管中，DMSO終濃度為10%,。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化,。

3. 輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4 . 收到細(xì)胞后*傳代推薦將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，建議凍存一支備用，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2到1:4的比例進(jìn)行,。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

下面T25瓶為類,；

1,，細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗一遍后加入1-2mlyi酶（含EDTA）,，細(xì)胞變圓脫落后，加入2-3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。

2，4min 1000rpm 離心去掉上清,。加1ml血清重懸細(xì)胞,，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和等體積的凍存液，輕輕混勻,，DMSO終濃度為10%,，細(xì)胞密度不低于1x10E6/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,，注意凍存管做好標(biāo)識,。

3，將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。