小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成半選擇性屏障,，該屏障對(duì)于肺氣體交換,，調(diào)節(jié)液體和可溶物在血液與肺間質(zhì)之間的流動(dòng)具有重要意義。它還具有代謝功能,，可以執(zhí)行一定的非呼吸功能,。在肺損傷中，肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞是活性氧類的重要靶細(xì)胞之一,。

在肺炎的發(fā)生過程中,，神經(jīng)體液介質(zhì)和氧化劑作用于內(nèi)皮細(xì)胞，使得細(xì)胞間隙滲透性增加,，蛋白質(zhì)由血液進(jìn)入間質(zhì),。細(xì)胞間隙滲透性的增加導(dǎo)致低氧血癥，出現(xiàn)成人呼吸窘迫綜合征和非心源性肺水腫,。

小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常肺組織,，細(xì)胞為上皮樣，多角形細(xì)胞,，貼壁培養(yǎng),，采用CD31免疫熒光染色鑒定為陽性，細(xì)胞純度高于90%,，不含有 HIV-1,、 HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌。

1.試驗(yàn)所需儀器設(shè)備及試劑

（1）儀器

（2）試劑耗材

2,、小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)

1) 將5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中,，移入生物安全柜，

2) 從胸部解剖乳鼠,，取出雙肺置于預(yù)冷的PBS中,，盡可能的除去結(jié)締組織等，

3) 取肺邊緣部分,，剪碎,，將組織塊移入T25培養(yǎng)瓶中，倒置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中,，

4) 2h后,，培養(yǎng)瓶中注入2 mL內(nèi)皮培養(yǎng)基，小心將培養(yǎng)瓶正置于培養(yǎng)箱,，確保組織塊不會(huì)飄起來，

5) 每3d換液2mL,，待細(xì)胞從組織塊中爬出來后,，隔2d換液，待細(xì)胞融合達(dá)到60-70%左右時(shí),，去除組織塊,，將肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞重新鋪瓶。