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 HEK-293T細(xì)胞是293T（293tsA1609neo）細(xì)胞系（ATCC CRL-11268）的衍生物。細(xì)胞持續(xù)表達(dá)SV40抗原,，該細(xì)胞常用于轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn),，轉(zhuǎn)染效率較高。（轉(zhuǎn)染一般以50%密度鋪板,，待細(xì)胞剛剛貼到皿壁上后（一般8-10小時(shí)）,，即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作）

293T細(xì)胞的培養(yǎng)條件除了用DMEM（推薦iCell-0001）培養(yǎng)基,；胎牛血清,，10%；還要添加L-谷氨酰胺（2mM）1%,；NEAA  1% ,； 雙抗 1%等添加物，但是293T細(xì)胞在培養(yǎng)的過程中貼壁能力較弱,，在培養(yǎng)過程中特別要注意：

先,，293T細(xì)胞貼壁能力較弱，培養(yǎng)時(shí)可酌情使用預(yù)鋪0.2%明膠的培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿,。wan全培養(yǎng)液中需添加熱滅活胎牛血清,。細(xì)胞生長不能過密，過密細(xì)胞容易脫落,，脫落下來的細(xì)胞可以通過離心收集,，使用0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA 消化后繼續(xù)培養(yǎng)。

其次,，如果發(fā)生293T細(xì)胞不貼壁,，漂浮在培養(yǎng)基中的現(xiàn)象，請(qǐng)確認(rèn)所使用的DMEM中碳酸氫鈉濃度及培養(yǎng)箱中CO2濃度,。并參考以下培養(yǎng)體系：

a) DMEM由1.5 g/L碳酸氫鈉配制而成,，使用5％CO2培養(yǎng)箱。

b) DMEM由3.7 g/L碳酸氫鈉配制而成,，使用10％CO2培養(yǎng)箱,。

當(dāng)使用碳酸氫鈉含量高的培養(yǎng)基時(shí)，必須將這些細(xì)胞在10％CO2中孵育,，以便正確緩沖培養(yǎng)基,。當(dāng)培養(yǎng)基沒有適當(dāng)緩沖時(shí)，239T細(xì)胞雖然可以存活，但將無法粘附并保持漂浮在培養(yǎng)基中,。

293T細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞,，傳代可以參考以下方法：

1. 收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。由于細(xì)胞貼壁不牢PBS潤洗后細(xì)胞會(huì)脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL,，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間）,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。

3. 將收集到的懸浮細(xì)胞、pbs清洗液中的細(xì)胞和消化下來的貼壁細(xì)胞以1000rpml離心5min,，棄去上清,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的wan全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行,。

3） 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

293T細(xì)胞參考文獻(xiàn)：

【1】Ding L, Zeng Q, Wu J, et al. Caveolin1 regulates oxidative stressinduced senescence in nucleus pulposus cells primarily via the p53/p21 signaling pathway in vitro[J]. Molecular Medicine Reports, 2017, 16(6): 9521-9527.

【2】邱進(jìn), 劉輝, 袁芳, 等. MEF2C 基因啟動(dòng)子區(qū)堿基突變對(duì)轉(zhuǎn)錄活性的影響[J]. 新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2017, 40(5): 606-611.

【3】Geng F, Lu G F, Ji M H, et al. MicroRNA-26b-3p/ANTXR1 signaling modulates proliferation, migration, and apoptosis of glioma[J]. American journal of translational research, 2019, 11(12): 7568.