小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的重要成分,，它們參與了神經(jīng)炎癥、神經(jīng)修復(fù)和神經(jīng)再生等過程,。近年來,，對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞的研究已經(jīng)成為神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域的一個(gè)熱點(diǎn)。為了更好地研究小膠質(zhì)細(xì)胞的功能和作用,，本實(shí)驗(yàn)旨在提取小鼠小膠質(zhì)BV2細(xì)胞,，并對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)。
一,、材料與方法
1,、材料
實(shí)驗(yàn)所需材料包括：新生SD小鼠（1～3天）、DMEM培養(yǎng)基,、胎牛血清,、青霉素、鏈霉素,、Trizol,、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、PCR儀,、細(xì)胞培養(yǎng)皿等,。
2、方法
?。?）小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞的提取
提取小膠質(zhì)細(xì)胞前,，先將新生SD小鼠處死，用DMEM培養(yǎng)基沖洗組織,，去除血管和腦膜等雜質(zhì),。然后將腦組織剪碎，加入Trizol,，靜置5分鐘,，再用超聲波破碎細(xì)胞。最后,，加入氯仿,，離心5分鐘，取上清液,，得到總RNA,。
（2）逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
將提取的總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,，反應(yīng)體系如下：總RNA1μg,、Oligo（dT）181μl、dNTPMix1μl,、5×PrimeScriptBuffer2μl,、PrimeScriptRTEnzymeMixⅠ1μl、RNaseFreedH2O6μl,。反應(yīng)條件為：37℃15分鐘,，85℃5秒。得到cDNA產(chǎn)物可以用于PCR擴(kuò)增,。
?。?）PCR擴(kuò)增
采用PCR方法對(duì)cDNA進(jìn)行擴(kuò)增,，反應(yīng)體系如下：cDNA2μl、PrimerF1μl,、PrimerR1μl,、2×TaqPCRMasterMix10μl、ddH2O7μl,。反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性5分鐘,；94℃變性30秒，60℃退火30秒,，72℃延伸30秒,，共35個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10分鐘,。最后進(jìn)行電泳分析,，觀察擴(kuò)增結(jié)果。
?。?）細(xì)胞培養(yǎng)
將提取的小膠質(zhì)細(xì)胞接種于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，加入適量DMEM培養(yǎng)基和胎牛血清，置于37℃,、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。每天觀察細(xì)胞的生長情況，并適時(shí)更換培養(yǎng)基,。
二,、結(jié)果與分析
通過PCR擴(kuò)增，我們成功地得到了小鼠小膠質(zhì)BV2細(xì)胞的基因表達(dá)譜,。通過對(duì)比正常小鼠和模型小鼠的小膠質(zhì)細(xì)胞基因表達(dá)譜,，我們發(fā)現(xiàn)了一些差異表達(dá)的基因。這些基因可能參與了小膠質(zhì)細(xì)胞的活化和神經(jīng)炎癥的發(fā)生,。此外,，我們還發(fā)現(xiàn)了一些與神經(jīng)修復(fù)和神經(jīng)再生相關(guān)的基因在小鼠小膠質(zhì)BV2細(xì)胞中高表達(dá)。這些結(jié)果為進(jìn)一步研究小膠質(zhì)細(xì)胞的功能和作用提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù),。
本實(shí)驗(yàn)成功地提取了小鼠小膠質(zhì)BV2細(xì)胞并對(duì)其進(jìn)行了培養(yǎng),。通過基因表達(dá)譜分析，發(fā)現(xiàn)了一些與小膠質(zhì)細(xì)胞活化,、神經(jīng)炎癥,、神經(jīng)修復(fù)和神經(jīng)再生相關(guān)的差異表達(dá)基因。這些結(jié)果為深入研究小膠質(zhì)細(xì)胞的功能和作用提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù),。
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