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　　小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的重要成分,，它們參與了神經(jīng)炎癥,、神經(jīng)修復(fù)和神經(jīng)再生等過(guò)程。近年來(lái),，對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞的研究已經(jīng)成為神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域的一個(gè)熱點(diǎn),。為了更好地研究小膠質(zhì)細(xì)胞的功能和作用，本實(shí)驗(yàn)旨在提取小鼠小膠質(zhì)BV2細(xì)胞,，并對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng),。

　　

　　一、材料與方法

　　

　　1,、材料

　　

　　實(shí)驗(yàn)所需材料包括：新生SD小鼠（1～3天）,、DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清,、青霉素,、鏈霉素、Trizol,、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒,、PCR儀、細(xì)胞培養(yǎng)皿等,。

　　

　　2,、方法

　　

　　（1）小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞的提取

　　

　　提取小膠質(zhì)細(xì)胞前,，先將新生SD小鼠處死,，用DMEM培養(yǎng)基沖洗組織,，去除血管和腦膜等雜質(zhì)。然后將腦組織剪碎,，加入Trizol,，靜置5分鐘，再用超聲波破碎細(xì)胞,。最后,，加入氯仿，離心5分鐘,，取上清液,，得到總RNA。

　　

　?。?）逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

　　

　　將提取的總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,，反應(yīng)體系如下：總RNA1μg、Oligo（dT）181μl,、dNTPMix1μl,、5×PrimeScriptBuffer2μl、PrimeScriptRTEnzymeMixⅠ1μl,、RNaseFreedH2O6μl,。反應(yīng)條件為：37℃15分鐘，85℃5秒,。得到cDNA產(chǎn)物可以用于PCR擴(kuò)增,。

　　

　　（3）PCR擴(kuò)增

　　

　　采用PCR方法對(duì)cDNA進(jìn)行擴(kuò)增,，反應(yīng)體系如下：cDNA2μl,、PrimerF1μl、PrimerR1μl,、2×TaqPCRMasterMix10μl,、ddH2O7μl。反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性5分鐘,；94℃變性30秒,，60℃退火30秒，72℃延伸30秒,，共35個(gè)循環(huán),；最后72℃延伸10分鐘。最后進(jìn)行電泳分析,，觀察擴(kuò)增結(jié)果,。

　　

　　（4）細(xì)胞培養(yǎng)

　　

　　將提取的小膠質(zhì)細(xì)胞接種于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，加入適量DMEM培養(yǎng)基和胎牛血清,，置于37℃,、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每天觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況,，并適時(shí)更換培養(yǎng)基,。

　　

　　二、結(jié)果與分析

　　

　　通過(guò)PCR擴(kuò)增,，我們成功地得到了小鼠小膠質(zhì)BV2細(xì)胞的基因表達(dá)譜。通過(guò)對(duì)比正常小鼠和模型小鼠的小膠質(zhì)細(xì)胞基因表達(dá)譜,，我們發(fā)現(xiàn)了一些差異表達(dá)的基因,。這些基因可能參與了小膠質(zhì)細(xì)胞的活化和神經(jīng)炎癥的發(fā)生。此外,，我們還發(fā)現(xiàn)了一些與神經(jīng)修復(fù)和神經(jīng)再生相關(guān)的基因在小鼠小膠質(zhì)BV2細(xì)胞中高表達(dá),。這些結(jié)果為進(jìn)一步研究小膠質(zhì)細(xì)胞的功能和作用提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

　　

　　本實(shí)驗(yàn)成功地提取了小鼠小膠質(zhì)BV2細(xì)胞并對(duì)其進(jìn)行了培養(yǎng),。通過(guò)基因表達(dá)譜分析,，發(fā)現(xiàn)了一些與小膠質(zhì)細(xì)胞活化、神經(jīng)炎癥,、神經(jīng)修復(fù)和神經(jīng)再生相關(guān)的差異表達(dá)基因,。這些結(jié)果為深入研究小膠質(zhì)細(xì)胞的功能和作用提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。