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　　穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系（穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株）指在細(xì)胞中持續(xù)穩(wěn)定表達(dá)特定基因或干擾特定基因表達(dá)。穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的目的基因質(zhì)粒DNA整合到細(xì)胞染色體上,，使細(xì)胞長期穩(wěn)定表達(dá)該基因,。穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株包括多克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株和單克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。慢病毒感染目的細(xì)胞后,，通過抗性基因篩選得到的細(xì)胞株是多個細(xì)胞克隆的組合,。單克隆細(xì)胞株是從多克隆細(xì)胞中經(jīng)細(xì)胞克隆挑選得到的，由一個細(xì)胞擴(kuò)增得到的細(xì)胞株,。單克隆細(xì)胞株性狀統(tǒng)一,，傳代過程中細(xì)胞的基因表達(dá)保持穩(wěn)定。
 

　　

　　篩選穩(wěn)定細(xì)胞株的兩種方法：

　　

　　1,、轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后,，單克隆方法篩選穩(wěn)定細(xì)胞系

　　

　　對大多數(shù)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率較低。對于基因過表達(dá),，如果轉(zhuǎn)染效率達(dá)到40%,，基因過表達(dá)尚可。但是對于基因干擾實驗,，對轉(zhuǎn)染效率要求遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于基因過表達(dá),，通常質(zhì)粒轉(zhuǎn)染無法滿足。

　　

　　另外,，質(zhì)粒游離于細(xì)胞質(zhì)中,，很快降解，無法滿足較長時間的檢測項目,；質(zhì)粒轉(zhuǎn)染整合幾率極低,，穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建耗時耗力，且得率很低,，往往需要挑取單克隆株,。

　　

　　2、病毒感染篩選穩(wěn)定細(xì)胞株

　　

　　病毒感染方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染篩選單克隆方法更方便和高效，是目前主流的穩(wěn)定細(xì)胞系篩選方法,。用慢病毒制備穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,，由于其高效整合,、高效轉(zhuǎn)錄,、高效表達(dá)、宿主范圍廣,，感染效率高,，且與細(xì)胞染色體整合而不發(fā)生基因重排，是制備穩(wěn)定細(xì)胞株的理想載體,。

　　

　　穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株服務(wù)流程：

　　

　　1,、載體構(gòu)建：將外源基因構(gòu)建到合適的載體上，如需病毒轉(zhuǎn)染,，則包裝病毒,。

　　

　　2、篩選濃度測定：以10-14天細(xì)胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度,。

　　

　　3,、細(xì)胞接種：轉(zhuǎn)染實驗前天接種細(xì)胞，各種細(xì)胞的平板密度依據(jù)各種細(xì)胞的生長率和細(xì)胞形狀而定,。進(jìn)行轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞應(yīng)達(dá)到60%-80%覆蓋,。

　　

　　4、細(xì)胞轉(zhuǎn)染：用構(gòu)建好的載體（或包裝好的病毒）轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞,。

　　

　　5,、抗生素篩選。

　　

　　6,、鑒定篩選結(jié)果,。