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鏡像綺點(diǎn)(上海)細(xì)胞技術(shù)...

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人胚腎細(xì)胞293T要如何研究,?

閱讀:1280      發(fā)布時(shí)間:2021-9-18
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  人胚腎細(xì)胞293T,,上皮狀,早期報(bào)道中指出該細(xì)胞基因組中含有腺病毒5(Ad5)基因組的左側(cè)端和右側(cè)端的DNA,,但是明確了只存在其左側(cè)端的DNA,。經(jīng)過(guò)對(duì)Ad5的插入點(diǎn)的克隆測(cè)序發(fā)現(xiàn),Ad5的1~4344位線性核苷酸整合入細(xì)胞染色體19q13.2,。該細(xì)胞為人類腺病毒載體擴(kuò)增的宿主,。可表達(dá)異常的玻連蛋白的細(xì)胞表面受體,,由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成,。生物安全級(jí)別為2級(jí)。
  1,、研究的對(duì)象是活細(xì)胞
  在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控,、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu),、生命活動(dòng)等,。
  2、研究條件可以人為控制
  pH,、溫度,、氧氣、二氧化碳,、張力等物理化學(xué)的條件,,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),,可以施加化學(xué),、物理,、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
  3、人胚腎細(xì)胞293T研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
  通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化,。
  4,、研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
  采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡,、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù),、激光共焦顯微鏡,、免疫組織化學(xué)、原位雜交,、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備,。
  1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
  2)人胚腎細(xì)胞293T細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

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