日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

　　說說人表皮永生化細胞HACAT的培養(yǎng)步驟,。

　　1、復蘇細胞：在37℃水浴中快速搖動裝有1mL細胞懸液的冷凍管融化,，加入5mL培養(yǎng)基并充分混合。在1000RPM下離心5分鐘,，棄去上清液,，加入4-6mL*培養(yǎng)基并充分吹掃。然后將所有細胞懸浮液添加到培養(yǎng)瓶中,，并培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘腋∫禾砑拥?cm皿中）并培養(yǎng)過夜,。第二天換培養(yǎng)基，檢查細胞密度,。

　　2,、細胞傳代：如果細胞密度達到80％-90％，則可以傳代培養(yǎng),。
 

　　對于貼壁人表皮永生化細胞HACAT ,，傳代可參考以下方法：

　　（1）棄去培養(yǎng)上清液,，并用不含鈣和鎂離子的PBS沖洗細胞1-2次,。

　　（2）向培養(yǎng)瓶中加入1-2ml消化液（0.25％胰蛋白酶-0.53mMEDTA）,，將其置于37℃的培養(yǎng)箱中1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細胞的消化情況，如果大部分細胞旋轉(zhuǎn)并掉落后,，迅速將其帶回手術臺,，輕敲培養(yǎng)瓶幾次,，并加入5ml以上含10％血清的*培養(yǎng)基終止消化。

　?。?）輕輕吹干細胞,，然后將其*吸出。以1000RPM離心8-10分鐘,，棄去上清液,，加入1-2mL培養(yǎng)基并充分吹掃。

　?。?）加入5-6ml/瓶培養(yǎng)液,，然后將細胞懸液分成新的培養(yǎng)皿或瓶，其中裝有5-6ml培養(yǎng)液的比例為1：2至1：5,。

　　對于懸浮人表皮永生化細胞HACAT,，傳代可參考以下方法：

　　（1）收集細胞,，以1000RPM離心8-10分鐘,，棄去上清液，并加入1-2mL培養(yǎng)基吹凈,，然后將細胞懸液分成新的培養(yǎng)皿或瓶,，其中含有8ml培養(yǎng)基，比例為1：2至1：5,。

　?。?）可以選擇一半的介質(zhì)更換方法。丟棄一半培養(yǎng)基后,，懸浮剩余的細胞,，然后將細胞懸浮液分成新的含有8ml培養(yǎng)基的細胞懸浮液，比例為1：2至1：3,。在盤子或瓶子里,。

　　3、細胞凍存：當細胞生長良好時,，可以將其冷凍保存,。將貼壁細胞冷凍保存后，棄去培養(yǎng)基并加入少量胰蛋白酶,。細胞變成圓形并脫落后,，通過離心收集它們。