液相系統(tǒng)一般由高壓輸液泵,、進樣器,、色譜柱、檢測器,、數(shù)據(jù)記錄及處理裝置等組成,。其中輸液泵、色譜柱,、檢測器是關鍵部件,。有的儀器還有梯度洗脫裝置、在線脫氣機,、自動進樣器、預柱或保護柱,、柱溫控制器等,，現(xiàn)代HPLC儀還有微機控制系統(tǒng)，進行自動化儀器控制和數(shù)據(jù)處理,。制備型HPLC儀還備有自動餾分收集裝置,。
一、高壓輸液泵
高壓輸液泵是HPLC系統(tǒng)中zui重要的部件之一,。泵的性能好壞直接影響到整個系統(tǒng)的質(zhì)量和分析結(jié)果的可靠性,。輸液泵應具備如下性能：①流量穩(wěn)定，其RSD應＜0.5%,，這對定性定量的準確性至關重要,；②流量范圍寬，分析型應在范圍內(nèi)連續(xù)可調(diào),，制備型應能達到100ml/min,；③輸出壓力高，一般應能達到150~300kg/cm2,；④液缸容積??；⑤密封性能好，耐腐蝕,。
泵的種類很多,，按輸液性質(zhì)可分為恒壓泵和恒流泵；恒流泵按結(jié)構(gòu)又可分為螺旋注射泵,、柱塞往復泵和隔膜往復泵,。恒壓泵受柱阻影響，流量不穩(wěn)定,；螺旋泵缸體太大,，這兩種泵已被淘汰。目前應用zui多的是柱塞往復泵,。
柱塞往復泵的液缸容積小,，可至0.1ml，因此易于清洗和更換流動相,，特別適合于再循環(huán)和梯度洗脫,；改變電機轉(zhuǎn)速能方便地調(diào)節(jié)流量，流量不受柱阻影響,。其主要缺點是輸出的脈沖性較大,，現(xiàn)多采用雙泵系統(tǒng)來克服。雙泵按連接方式可分為并聯(lián)式和串聯(lián)式,，一般說來并聯(lián)泵的流量重現(xiàn)性較好（RSD為0.1%左右,，串聯(lián)泵為0.2~0.3%），但出故障的機會較多（因多一單向閥）,，價格也較貴,。
歐世盛是專業(yè)高壓輸液泵等精密儀器核心部件供應商，我們的高壓輸液泵采用耐腐蝕的材質(zhì),，瑞士*單向閥,，美國原裝密封圈和壓力傳感器，使用壽命長,，冷壓柱塞桿,，同軸度偏差zui小，特殊凸輪設計,，減小壓力脈動,，多種電機規(guī)格可供選擇，電機等部件可選范圍廣,，流量精度高,。進口的品質(zhì)，國產(chǎn)的價格,，受到各行業(yè)的*,！
二,、進樣器
早期使用隔膜和停流進樣器，裝在色譜柱入口處?，F(xiàn)在大都使用六通進樣閥或自動進樣器,。進樣裝置要求：密封性好，死體積小,，重復性好,，保證中心進樣，進樣時對色譜系統(tǒng)的壓力,、流量影響小,。HPLC進樣方式可分為：隔膜進樣、停流進樣,、閥進樣,、自動進樣。
【隔膜進樣】
用微量注射器將樣品注入專門設計的與色譜柱相連的進樣頭內(nèi),，可把樣品直接送到柱頭填充床的中心,，死體積幾乎等于零，可以獲得*的柱效,，且價格便宜,，操作方便。但不能在高壓下使用（如10MPa以上）,；此外隔膜容易吸附樣品產(chǎn)生記憶效應,，使進樣重復性只能達到1~2%；加之能耐各種溶劑的橡皮不易找到,，常規(guī)分析使用受到限制,。
【停流進樣】
可避免在高壓下進樣。但在HPLC中由于隔膜的污染,，停泵或重新啟動時往往會出現(xiàn)“鬼峰”；另一缺點是保留時間不準,。在以峰的始末信號控制餾分收集的制備色譜>中,，效果較好。
【閥進樣】
一般HPLC分析常用六通進樣閥（以美國Rheodyne公司的7725和7725i型zui常見）,，其關鍵部件由圓形密封墊（轉(zhuǎn)子）和固定底座（定子）組成,。由于閥接頭和連接管死體積的存在，柱效率低于隔膜進樣（約下降5~10%左右）,，但耐高壓（35~40MPa）,，進樣量準確，重復性好（0.5%）,，操作方便,。
【自動進樣】
用于大量樣品的常規(guī)分析,。
三、色譜柱
色譜是一種分離分析手段,，分離是核心,，因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高,、選擇性好,，分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相,、氧化鋁,、有機聚合物微球（包括離子交換樹脂）、多孔碳等,，其粒度一般為3,5,7,10μm等,，柱效理論值可達5~16萬/米。對于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效,；對于同系物分析,，只要500即可；對于較難分離物質(zhì)對則可采用高達2萬的柱子,，因此一般10~30cm左右的柱長就能滿足復雜混合物分析的需要,。
柱效受柱內(nèi)外因素影響，為使色譜柱達到*效率,，除柱外死體積要小外,，還要有合理的柱結(jié)構(gòu)（盡可能減少填充床以外的死體積）及裝填技術(shù)。即使的裝填技術(shù),，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的,，靠近管壁的部位比較疏松，易產(chǎn)生溝流,，流速較快,，影響沖洗劑的流形，使譜帶加寬,，這就是管壁效應,。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍粒徑的厚度。在一般的液相色譜系統(tǒng)中,，柱外效應對柱效的影響遠遠大于管壁效應,。
【柱的構(gòu)造】
色譜柱由柱管、壓帽,、卡套（密封環(huán)）,、篩板（濾片）、接頭,、螺絲等組成,。柱管多用不銹鋼制成,，壓力不高于時，也可采用厚壁玻璃或石英管,，管內(nèi)壁要求有很高的光潔度,。為提高柱效，減小管壁效應,，不銹鋼柱內(nèi)壁多經(jīng)過拋光,。也有人在不銹鋼柱內(nèi)壁涂敷氟塑料以提高內(nèi)壁的光潔度，其效果與拋光相同,。還有使用熔融硅或玻璃襯里的,，用于細管柱。色譜柱兩端的柱接頭內(nèi)裝有篩板,，是燒結(jié)不銹鋼或鈦合金,，孔徑0.2~20μm(5~10μm)，取決于填料粒度,，目的是防止填料漏出,。
色譜柱按用途可分為分析型和制備型兩類，尺寸規(guī)格也不同：①常規(guī)分析柱（常量柱）,，內(nèi)徑2~5mm（常用4.6mm,，國內(nèi)有4mm和5mm），柱長10~30cm,；②窄徑柱（又稱細管徑柱,、半微柱semi-microcolumn），內(nèi)徑1~2mm,，柱長10~20cm,；③毛細管柱（又稱微柱microcolumn），內(nèi)徑0.2~0.5mm,；④半制備柱,，內(nèi)徑＞5mm；⑤實驗室制備柱,，內(nèi)徑20~40mm,，柱長10~30cm；⑥生產(chǎn)制備柱內(nèi)徑可達幾十厘米,。柱內(nèi)徑一般是根據(jù)柱長、填料粒徑和折合流速來確定,，目的是為了避免管壁效應,。
【柱的發(fā)展方向】
因強調(diào)分析速度而發(fā)展出短柱，柱長3~10cm,，填料粒徑2~3μm,。為提高分析靈敏度,，與質(zhì)譜(MS)聯(lián)接，而發(fā)展出窄徑柱,、毛細管柱和內(nèi)徑小于0.2mm的微徑柱（microbore）,。細管徑柱的優(yōu)點是：①節(jié)省流動相；②靈敏度增加,；③樣品量少,；④能使用長柱達到高分離度；⑤容易控制柱溫,；⑥易于實現(xiàn)LC-MS聯(lián)用,。
但由于柱體積越來越小，柱外效應的影響就更加顯著,，需要更小池體積的檢測器（甚至采用柱上檢測）,，更小死體積的柱接頭和連接部件。配套使用的設備應具備如下性能：輸液泵能精密輸出1~100μl/min的低流量,，進樣閥能準確,、重復地進樣微小體積的樣品。且因上樣量小,，要求高靈敏度的檢測器,，電化學檢測器和質(zhì)譜儀在這方面具有突出優(yōu)點。
【柱的填充和性能評價】
色譜柱的性能除了與固定相性能有關外,，還與填充技術(shù)有關,。在正常條件下，填料粒度＞20μm時,，干法填充制備柱較為合適,；顆粒＜20μm時，濕法填充較為理想,。填充方法一般有4種：①高壓勻漿法,，多用于分析柱和小規(guī)模制備柱的填充；②徑向加壓法,，Waters>,；③軸向加壓法，主要用于裝填大直徑柱,；④干法,。柱填充的技術(shù)性很強，大多數(shù)實驗室使用已填充好的商品柱,。
必須指出,，液相色譜柱的獲得，裝填技術(shù)是重要環(huán)節(jié)，但根本問題還在于填料本身性能的優(yōu)劣,，以及配套的色譜儀系統(tǒng)的的結(jié)構(gòu)是否合理,。
四、檢測器
檢測器是HPLC儀的三大關鍵部件之一,。其作用是把洗脫液中組分的量轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?。HPLC的檢測器要求靈敏度高、噪音低（即對溫度,、流量等外界變化不敏感）,、線性范圍寬、重復性好和適用范圍廣,。
【分類】
按原理可分為光學檢測器（如紫外,、熒光、示差折光,、蒸發(fā)光散射）,、熱學檢測器（如吸附熱）、電化學檢測器（如極譜,、庫侖,、安培）、電學檢測器（電導,、介電常數(shù),、壓電石英頻率）、放射性檢測器（閃爍計數(shù),、電子捕獲,、氦離子化）以及氫火焰離子化檢測器。
按測量性質(zhì)可分為通用型和專屬型（又稱選擇性）,。通用型檢測器測量的是一般物質(zhì)均具有的性質(zhì),，它對溶劑和溶質(zhì)組分均有反應，如示差折光,、蒸發(fā)光散射檢測器,。通用型的靈敏度一般比專屬型的低。專屬型檢測器只能檢測某些組分的某一性質(zhì),，如紫外,、熒光檢測器，它們只對有紫外吸收或熒光發(fā)射的組分有響應,。
按檢測方式分為濃度型和質(zhì)量型,。濃度型檢測器的響應與流動相中組分的濃度有關，質(zhì)量型檢測器的響應與單位時間內(nèi)通過檢測器的組分的量有關,。
檢測器還可分為破壞樣品和不破壞樣品的兩種,。
【性能指標】
噪音和漂移：在儀器穩(wěn)定之后，記錄基線1小時，基線帶寬為噪音,，基線在1小時內(nèi)的變化為漂移。它們反映檢測器電子元件的穩(wěn)定性,，及其受溫度和電源變化的影響,，如果有流動相從色譜柱流入檢測器，那么它們還反映流速（泵的脈動）和溶劑（純度,、含有氣泡,、固定相流失）的影響。噪音和漂移都會影響測定的準確度,，應盡量減小,。
靈敏度(sensitivity)：表示一定量的樣品物質(zhì)通過檢測器時所給出的信號大小。對濃度型檢測器,，它表示單位濃度的樣品所產(chǎn)生的電信號的大小,，單位為mV·ml/g。對質(zhì)量型檢測器,，它表示在單位時間內(nèi)通過檢測器的單位質(zhì)量的樣品所產(chǎn)生的電信號的大小,，單位為mV·s/g。
檢測限：檢測器靈敏度的高低,，并不等于它檢測zui小樣品量或zui低樣品濃度能力的高低,，因為在定義靈敏度時，沒有考慮噪聲的大小,，而檢測限與噪聲的大小是直接有關的,。
檢測限是檢測器的一個主要性能指標，其數(shù)值越小,，檢測器性能越好,。值得注意的是，分析方法的檢測限除了與檢測器的噪聲和靈敏度有關外,，還與色譜條件,、色譜柱和泵的穩(wěn)定性及各種柱外因素引起的峰展寬有關。
線性范圍：指檢測器的響應信號與組分量成直線關系的范圍,，即在固定靈敏度下,，zui大與zui小進樣量（濃度型檢測器為組分在流動相中的濃度）之比。也可用響應信號的zui大與zui小的范圍表示,，例如
檢測器的線性范圍是-0.1~2.0A,。
線性范圍一般可通過實驗確定。我們希望檢測器的線性范圍盡可能大些,，能同時測定主成分和痕量成分,。此外還要求池體積小，受溫度和流速的影響小，能適合梯度洗脫檢測等,。
池體積：除制備色譜外,，大多數(shù)HPLC檢測器的池體積都小于10μl。在使用細管徑柱時,，池體積應減少到1~2μl甚至更低,，不然檢測系統(tǒng)帶來的峰擴張問題就會很嚴重。而且這時池體,、檢測器與色譜柱的連接,、接頭等都要精心設計，否則會嚴重影響柱效和靈敏度,。
五,、數(shù)據(jù)處理和計算機控制系統(tǒng)
早期的HPLC儀器是用記錄儀記錄檢測信號，再手工測量計算,。其后,，使用積分儀計算并打印出峰高、峰面積和保留時間等參數(shù),。80年代后,，計算機技術(shù)的廣泛應用使HPLC操作更加快速、簡便,、準確,、精密和自動化，現(xiàn)在已可在互聯(lián)網(wǎng)上遠程處理數(shù)據(jù),。計算機的用途包括三個方面：①采集,、處理和分析數(shù)據(jù)；②控制儀器,；③色譜系統(tǒng)優(yōu)化和專家系統(tǒng),。
六、恒溫裝置
在HPLC儀中色譜柱及某些檢測器都要求能準確地控制工作環(huán)境溫度,，柱子的恒溫精度要求在±0.1~0.5℃之間,，檢測器的恒溫要求則更高。
溫度對溶劑的溶解能力,、色譜柱的性能,、流動相的粘度都有影響。一般來說,，溫度升高,，可提高溶質(zhì)在流動相中的溶解度，從而降低其分配系數(shù)K,，但對分離選擇性影響不大,；還可使流動相的粘度降低,，從而改善傳質(zhì)過程并降低柱壓。但溫度太高易使流動相產(chǎn)生氣泡,。
色譜柱的不同工作溫度對保留時間,、相對保留時間都有影響。在凝膠色譜中使用軟填料時溫度會引起填料結(jié)構(gòu)的變化,，對分離有影響,；但如使用硬質(zhì)填料則影響不大。
總的說來,，在液固吸附色譜法和化學鍵合相色譜法中，溫度對分離的影響并不顯著,，通常實驗在室溫下進行操作,。在液固色譜中有時將極性物質(zhì)（如緩沖劑）加入流動相中以調(diào)節(jié)其分配系數(shù)，這時溫度對保留值的影響很大,。
不同的檢測器對溫度的敏感度不一樣,。紫外檢測器一般在溫度波動超過±0.5℃時，就會造成基線漂移起伏,。示差折光檢測器的靈敏度和zui小檢出量常取決于溫度控制精度,，因此需控制在±0.001℃左右，微吸附熱檢測器也要求在±0.001℃以內(nèi),。
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