您好, 歡迎來(lái)到化工儀器網(wǎng)
會(huì)員.png)
9
2101程序降溫儀的細(xì)胞凍存操作步驟
2101程序降溫儀的細(xì)胞凍存操作步驟
2101程序降溫儀簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)由程序來(lái)控制溫度,，慢慢的逐步減低保存溫度,，以免減溫速度過(guò)快,，冰晶刺破凍存樣品（如細(xì)胞,、胚胎,，降溫過(guò)快冰晶容易刺破其細(xì)胞壁）,，從而使得樣品失效,。也稱為程控降溫儀,、胚胎冷凍儀等等。主要應(yīng)用在精子,、細(xì)胞,、胚胎等領(lǐng)域的儲(chǔ)存，以及骨髓,、造血干細(xì)胞,、皮膚、角膜,、內(nèi)分泌腺體,、以及血管和瓣膜等的冷凍保存。
2101程序降溫儀進(jìn)行細(xì)胞冷凍保存：
1.材料
生長(zhǎng)良好之培養(yǎng)細(xì)胞,、新鮮培養(yǎng)基,、DMSO、無(wú)菌塑料冷凍保存管,、0.4%(w/v)trypanblue,、血球計(jì)數(shù)盤(pán)與蓋玻片,、2101程序降溫儀。
2.冷凍保存方法
(1)傳統(tǒng)方法：冷存管置于4℃10分鐘>-20℃30分鐘>-80℃16-18小時(shí)(或隔夜)>液氮槽長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。-20℃不可超過(guò)1小時(shí),，以防止胞內(nèi)冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
(2)程序降溫：利用已設(shè)定程序的2101程序降溫儀以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至(-80℃以下)-120℃,，再放在液氮槽長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。適用于懸浮型細(xì)胞與hybridoma之保存。
3.步驟
(1)冷凍前24-48小時(shí)更換半量或全量培養(yǎng)基,，使細(xì)胞處于指數(shù)生長(zhǎng)期,。
(2)配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養(yǎng)基,、血清,，逐滴加入二甲基亞砜(DMSO)至20%濃度，即制成雙倍的凍存液,，置于室溫下待用,。
(3)離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞，用加血清的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞,，取少量細(xì)胞懸浮液(約0.1ml)計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率,。
(4)取與細(xì)胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液,，并晃動(dòng)試管,，制成細(xì)胞凍存懸液(DMSO后濃度為5-10%)，使細(xì)胞濃度為1-5×106cells/ml,，混合均勻,，分裝于已標(biāo)示*之冷凍保存管中，1-2ml/vial,，并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測(cè),。嚴(yán)密封口后，注明細(xì)胞名稱,、代數(shù),、日期。然后進(jìn)行凍存,。
2101程序降溫儀廣泛用于凍存細(xì)胞,、胚胎等。采用微機(jī)控制技術(shù),，軟件,，能較準(zhǔn)確地控制液氮的施放量，從而保證被凍存的生物制品以適宜的冷凍速率降溫冷凍,。操作簡(jiǎn)便,、人機(jī)界面清楚。